本文關(guān)鍵詞：葫蘆素B對(duì)于結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖抑制作用的研究

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【摘要】：目的:將人結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞為研究對(duì)象,研究葫蘆素B對(duì)于人結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞的影響以及具體的分子機(jī)制,為將來結(jié)腸癌的藥物治療提供一定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:在含有10%胎牛血清,100u/ml青霉素和100u/ml鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中,將人結(jié)腸癌細(xì)胞株LS-174-T細(xì)胞放入其中,在溫度37℃,5%CO2溫箱中培養(yǎng),待細(xì)胞貼壁,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。采用以下實(shí)驗(yàn):1 CCK-8法檢測(cè)葫蘆素B對(duì)LS-174-T細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用將處于生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的人結(jié)腸癌細(xì)胞株LS-174-T細(xì)胞消化成單細(xì)胞懸液后,調(diào)整細(xì)胞濃度為5×103/ml,接種于96孔培養(yǎng)板中,每組均設(shè)置5個(gè)重復(fù)孔,分別加入質(zhì)量濃度為0.01μmol/L、0.1μmol/L、1.0μmol/L、10.0μmol/L及100.0μmol/L濃度的葫蘆素B,同時(shí)設(shè)空白組(DMSO溶劑對(duì)照組)和陰性對(duì)照組(不加藥物組)及調(diào)零孔(只加培養(yǎng)基),用CCK-8法通過Ascent酶標(biāo)儀檢測(cè)作用24、48及72h后細(xì)胞光密度值(OD值),計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率,繪制出細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。2流式細(xì)胞術(shù)PI染色法收集陰性對(duì)照組細(xì)胞和藥物組(0.1、1.0μmol/L)作用24h后細(xì)胞,收集細(xì)胞用預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞,2000rpm離心10min,洗滌細(xì)胞,加入300ul Binging Buffer懸浮,避光,室溫孵育15min,上機(jī)前5min加入5ul PI,上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。3熒光定量PCR法測(cè)定STAT3、caspase-3、及tert m RNA表達(dá)水平將人結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞混懸后均勻分配為三組,每組設(shè)三個(gè)樣本。均接種在25m L培養(yǎng)瓶中,隔夜后,分別加入含濃度為0.1、10μmol/L、1μmol/L的葫蘆素B。24h及48h后提取各組總RNA。應(yīng)用熒光定量PCR對(duì)STAT3、caspase-3、及tert基因的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果:1葫蘆素B對(duì)結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞的抑制作用CCK-8結(jié)果顯示,葫蘆素B對(duì)結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞有明顯的生長(zhǎng)抑制作用,并且呈時(shí)間-劑量依賴性,葫蘆素B作用組(0.01μmol/L、0.1μmol/L、1.0μmol/L、10.0μmol/L及100.0μmol/L)作用24h后,抑制率分別為(0.52±0.17)%,(11.34±0.13)%,(14.27±0.61)%,(19.73±2.54)%,(74.81±2.12)%,作用72h后,抑制率分別為(0.89±0.21)%,(34.31±0.29)%,(43.01±0.59)%,(71.21±1.77)%,(98.91±0.49)%.最大抑制率為100.0μmol/L作用72h出現(xiàn),為(98.91±0.49)%。2流式PI染色法分析細(xì)胞周期變化流式細(xì)胞儀PI染色法檢測(cè)藥物組和陰性對(duì)照組細(xì)胞周期變化,結(jié)果顯示與陰性對(duì)照組相比,不同藥物濃度(0.1、1.0μmol/L)作用24h后,對(duì)照組與0.1μmol/L,1.0μmol/L濃度組G0/G1期細(xì)胞比例分別為77.41±4.69%,58.31±3.15%和41.13±5.31%;G2/M期細(xì)胞比例分別為5.32±0.73%,14.17±0.82%和31.28±4.02%;S/期細(xì)胞比例為17.27±3.40%,27.52±4.71%和27.59±8.99%。隨葫蘆素B的濃度增加,處于G2/M期細(xì)胞的比例逐漸升高,G0/G1期細(xì)胞的比例卻逐漸降低。3熒光定量RT-PCR檢測(cè)葫蘆素B對(duì)Stat3,tert,及caspase3的m RNA表達(dá)量影響藥物(10μmol/L、1μmol/L、0.1μmol/L)作用24h及48h后,檢測(cè)Stat3,tert,及caspase3的m RNA表達(dá)量。結(jié)果顯示:Stat3與tert的m RNA表達(dá)量減少,與藥物濃度及作用時(shí)間呈現(xiàn)時(shí)間--劑量依賴性,而caspase3的表達(dá)量的增加,與藥物濃度及作用時(shí)間呈現(xiàn)時(shí)間--劑量依賴性。結(jié)論1對(duì)于人結(jié)腸腺癌LS174-T細(xì)胞株,葫蘆素B有非常明顯的抑制其生長(zhǎng)的作用,并且與時(shí)間和劑量呈正相關(guān)。2對(duì)于人結(jié)腸癌LS-174-T細(xì)胞株,葫蘆素B對(duì)其抑制作用可能和對(duì)細(xì)胞周期的影響有關(guān)聯(lián)。3葫蘆素B對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制作用最終可能導(dǎo)致其凋亡。4葫蘆素B作用于Stat3,tert因子,其m RNA表達(dá)量的減少呈現(xiàn)時(shí)間--劑量依賴性,而tert的m RNA表達(dá)量的增加則呈現(xiàn)時(shí)間--劑量依賴性。
【關(guān)鍵詞】：葫蘆素B 結(jié)腸癌 LS174-T 增殖 抑制
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-15
• 結(jié)果15-17
• 附圖17-18
• 附表18-19
• 討論19-23
• 結(jié)論23
• 參考文獻(xiàn)23-26
• 綜述 在結(jié)腸癌中葫蘆素B的應(yīng)用展望26-38
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 致謝38-39
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷39

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 劉亭彥;張美俠;鄧意輝;張洪亮;孫春艷;楊曉臨;季文樾;;葫蘆素B對(duì)喉癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制研究[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2008年09期

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本文編號(hào)：512955