發(fā)布時間：2017-07-03 03:08

  本文關鍵詞：高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素對白血病細胞作用的探討

  更多相關文章： 高三尖杉酯堿 阿霉素 急性髓系細胞白血病 凋亡 K562細胞 HUVEC細胞

【摘要】：目的:探討高三尖杉酯堿與蒽環(huán)類藥物阿霉素聯(lián)用時對白血病細胞的增殖,凋亡的影響及作用機制。方法:1.根據單獨給藥和聯(lián)合給藥方式,將高三尖杉酯堿,阿霉素處理K562細胞及HUVEC細胞后,MTT實驗分析出各組藥物不同作用時間后的細胞抑制率和IC50濃度,并做統(tǒng)計學分析。2.Annexin V-PE/7-AAD雙染法流式細胞術實驗檢測高三尖杉酯堿單藥,阿霉素單藥以及高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素作用于K562細胞,HUVEC細胞后細胞凋亡情況。3.使用Western blot法檢測高三尖杉酯堿,阿霉素及高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素聯(lián)合對K562細胞中PARP,RIP1及Caspase3表達的影響。結果:1.MTT實驗結果顯示高三尖杉酯堿,阿霉素以及高三尖杉酯堿+阿霉素對K562和HUVEC細胞的增殖均有抑制作用(P0.05,n=6),且有濃度依賴性。當聯(lián)合用藥時,相對于HUVEC細胞,對K562細胞的增殖抑制作用更強(P0.05,n=6)。2、高三尖杉酯堿及阿霉素均可誘導K562細胞凋亡,有濃度依賴性(P0.05,n=6);高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素作用于K562細胞,其凋亡率隨著藥物濃度的增加和時間的延長有顯著提升,表現(xiàn)出濃度及時間依賴性,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05,n=6)。3、Western blot實驗結果顯示,高三尖杉酯堿處理K562細胞24小時后各濃度組cleaved-PARP蛋白的表達量較對照組有明顯的上調趨勢;在100倍高三尖杉酯堿處理組中active-Caspase3蛋白明顯出現(xiàn)表達;阿霉素處理K562細胞24小時后,各濃度藥物處理組中cleaved-PARP蛋白的表達量均呈上調趨勢,active-Caspase3和RIP1均表達陰性。高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素作用于K562細胞24小時后,IC50濃度阿霉素組中active-Caspase-3和RIP1表達明顯上調,其他各單藥組和聯(lián)合用藥組中RIP1均為表達陽性,active-Caspase-3蛋白表達量明顯較100×HHT組高。結論:1.高三尖杉酯堿、阿霉素以及高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素均可抑制K562細胞和HUVEC細胞增殖。高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素用藥時對K562細胞的抑制作用較對HUVEC細胞強。2.高三尖杉酯堿及阿霉素均可誘導K562細胞凋亡,高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素時對K562細胞的凋亡增強并可誘導壞死性凋亡。3.高三尖杉酯堿及阿霉素均可通過誘導PARP降解促進K562細胞凋亡,且呈濃度依賴性;高濃度HHT可使active-Caspase-3表達,同時IC50濃度HHT聯(lián)合阿霉素可使active-Caspase-3增高及使RIPI表達呈陽性,提示該濃度組合可促進K562細胞發(fā)生凋亡及壞死性凋亡。
【關鍵詞】：高三尖杉酯堿 阿霉素 急性髓系細胞白血病 凋亡 K562細胞 HUVEC細胞
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• abstract5-9
• 縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料與方法12-23
• 2.1 主要試劑和材料12
• 2.2 主要設備12-13
• 2.3 試劑的配置13
• 2.4 細胞學實驗13-16
• 2.4.1 細胞復蘇13-14
• 2.4.2 細胞換液14
• 2.4.3 細胞傳代14-15
• 2.4.4 細胞凍存15-16
• 2.4.5 細胞計數16
• 2.5 MTT比色試驗（四唑鹽比色試驗）16-19
• 2.5.1 單藥作用于細胞及IC50濃度的測定16-18
• 2.5.2 高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素用藥測定細胞的抑制率18-19
• 2.6 流式細胞術檢測細胞凋亡率19-21
• 2.6.1 實驗原理19
• 2.6.2 實驗藥物的分組19-20
• 2.6.3 實驗步驟20-21
• 2.6.4 流式細胞儀檢測細胞凋亡21
• 2.7 Western blot檢測高三尖杉酯堿、阿霉素和高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素作用白血病細胞和正常細胞后相關蛋白的表達水平差異21-22
• 2.8 統(tǒng)計學方法22-23
• 第3章 結果23-30
• 3.1 高三尖杉酯堿、阿霉素，以及高三尖杉酯堿+阿霉素聯(lián)合作用對K562細胞和HUVEC細胞增殖的影響23-25
• 3.1.1 高三尖杉酯堿對K562細胞和HUVEC細胞增殖的影響23
• 3.1.2 阿霉素對K562細胞和HUVEC細胞增殖的影響23-24
• 3.1.3 高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素對K562細胞和HUVEC細胞增殖的影響24-25
• 3.2 Annexin V-PE/7-AAD雙染法檢測高三尖杉酯堿、阿霉素以及高三尖杉酯堿+阿霉素聯(lián)合作用對K562細胞和凋亡的影響25-28
• 3.2.1 Annexin V-PE/7-AAD雙染法檢測HHT作用K562細胞凋亡率25-26
• 3.2.2 Annexin V-PE/7-AAD雙染流式細胞術檢測阿霉素作用K562細胞凋亡率26-27
• 3.2.3 Annexin V-PE/7-AAD雙染法檢測HHT聯(lián)合ADM作用K562細胞凋亡率27-28
• 3.3 Western blot檢測高三尖杉酯堿、阿霉素以及高三尖杉酯堿+阿霉素作用白血病細胞后凋亡/壞死相關蛋白的表達水平差異28-30
• 第4章 討論30-34
• 4.1 高三尖杉酯堿，阿霉素及高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素對細胞增殖的影響30-31
• 4.1.1 對慢性粒細胞白血病急變株K562細胞的影響30-31
• 4.1.2 對人臍靜脈內皮細胞株（HUVEC）的影響31
• 4.2 高三尖杉酯堿，，阿霉素及高三尖杉酯堿聯(lián)合阿霉素對細胞凋亡的影響31-32
• 4.3 高三尖杉酯堿對K562細胞凋亡相關蛋白表達的影響32-34
• 第5章 結論34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻36-38
• 綜述 高三尖杉酯堿的作用機理及臨床應用38-44
• 參考文獻42-44

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10 趙e

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