本文關(guān)鍵詞：人類(lèi)肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞系Hep G2和Li-7在裸鼠體內(nèi)成瘤研究及其血清蛋白譜分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:將人類(lèi)肝細(xì)胞性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)細(xì)胞系Hep G2和Li-7的細(xì)胞懸液,分別接種在BALB/c A-nu裸鼠(雌性,4周齡)的左上肢背側(cè)皮下,以研究其在裸鼠體內(nèi)的致瘤作用。采用表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,SELDI-TOF-MS),在不同的時(shí)間點(diǎn)分析裸鼠體內(nèi)微量蛋白質(zhì)的變化,以篩選與肝癌相關(guān)的微量蛋白標(biāo)志物。方法:購(gòu)買(mǎi)商品化的Hep G2和Li-7細(xì)胞系,在大量傳代培養(yǎng)之后,選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,采用RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基將其配制成一定濃度的細(xì)胞懸液,并以一定的劑量接種在裸鼠的左上肢背側(cè)皮下。對(duì)照組在相同的部位接種同等劑量的RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基。觀察裸鼠的生長(zhǎng)情況,每周定時(shí)稱(chēng)量裸鼠體重。裸鼠取血采用摘眼球取血法。對(duì)于注射Hep G2細(xì)胞的裸鼠,分別在注射后的第20天,第40天和第60天的三個(gè)時(shí)間點(diǎn)取血,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均包括一組對(duì)照組和一組實(shí)驗(yàn)組裸鼠。對(duì)于注射Li-7細(xì)胞的裸鼠,在注射后的第40天取血。待所取得的血液凝固后,在常溫下離心6分鐘,轉(zhuǎn)速為6000 rpm(Revolutions Per Minute,轉(zhuǎn)/分鐘)。將獲得的血清分裝在新的ep管中,并立即凍存在超低溫(-80℃)冰箱。待裸鼠死亡之后,取出重要臟器肝,肺,腎,胃做病理檢查。采用SELDI-TOF-MS分析血清中的蛋白譜變化,利用質(zhì)譜儀系統(tǒng)自帶分析軟件(Ciphergen Protein Chip 3.0和Ciphergen Biomaker Wizard 3.1)和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS 16.0對(duì)所取得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,從而篩選出具有差異性的蛋白。結(jié)果:(1)兩種人類(lèi)HCC細(xì)胞系在裸鼠體內(nèi)均未形成瘤塊。注射Hep G2細(xì)胞的裸鼠解剖未發(fā)現(xiàn)臟器異常,注射Li-7細(xì)胞的裸鼠,其肝臟出現(xiàn)水腫,胃出現(xiàn)灶性粘膜腸化的現(xiàn)象;(2)注射Hep G2細(xì)胞的裸鼠,對(duì)照組裸鼠在生長(zhǎng)過(guò)程中的不同時(shí)間點(diǎn)間出現(xiàn)了9個(gè)差異微量蛋白,其中上調(diào)的有3個(gè),質(zhì)荷比(Mass-to-Charge Ratio,M/Z)分別為4014.16、4122.70和8373.05,下調(diào)的有3個(gè),M/Z分別為1264.62、1491.80和22582.5。實(shí)驗(yàn)組裸鼠在生長(zhǎng)過(guò)程中的不同時(shí)間點(diǎn)間出現(xiàn)了29個(gè)差異蛋白,其中上調(diào)的有5個(gè),M/Z分別為3701.15、4560.87、8169.14、8258.08和12047.4,下調(diào)的有3個(gè),M/Z分別為1025.35、1045.15和4319.54,這些具有規(guī)律性變化的微量蛋白質(zhì)在對(duì)照裸鼠體內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組裸鼠在生長(zhǎng)過(guò)程中同時(shí)出現(xiàn)的差異蛋白有4個(gè),M/Z分別1264.62、1491.80、4014.16和8373.05,其中,4014.16和8373.05在對(duì)照組中上調(diào),1264.62和1491.80在對(duì)照組中下調(diào),而這4個(gè)蛋白在實(shí)驗(yàn)組中沒(méi)有規(guī)律性變化。(3)注射Li-7細(xì)胞的裸鼠,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)了12個(gè)差異性微量蛋白,M/Z分別為1027.39、1087.44、1179.59、1192.62、1483.17、1563.20、3763.00、3869.26、4319.54、6646.16、8793.72和9259.75。結(jié)論:1.人類(lèi)HCC細(xì)胞系Hep G2和Li-7在裸鼠體內(nèi)不致瘤。并不是每一種肝癌細(xì)胞系在裸鼠體內(nèi)都可以復(fù)制出模型。2.采用SELDI-TOF-MS分析血清的蛋白變化,篩選具有差異的蛋白,可以為肝癌的診斷和研究提供新思路。3.不同肝癌細(xì)胞系在裸鼠體內(nèi)所產(chǎn)生的的微量蛋白種類(lèi)和數(shù)量不同,提示不同細(xì)胞系的肝癌應(yīng)具有不同的微量蛋白標(biāo)志物。
【關(guān)鍵詞】：SELDI-TOF-MS HCC 蛋白質(zhì)組學(xué) Hep G2 Li-7
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-19
• 第一部分 人類(lèi) HCC 細(xì)胞系 Hep G2 和 Li-7 在裸鼠中的成瘤研究19-28
• 材料與方法19-28
• 1 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 2 主要實(shí)驗(yàn)試劑20
• 3 主要實(shí)驗(yàn)儀器20-21
• 4 實(shí)驗(yàn)方法21-28
• 第二部分 裸鼠血清蛋白譜分析28-31
• 1 實(shí)驗(yàn)材料28
• 2 主要實(shí)驗(yàn)試劑28
• 3 主要實(shí)驗(yàn)儀器28-29
• 4 實(shí)驗(yàn)方法29-31
• 結(jié)果31-41
• 討論41-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 英漢縮略詞對(duì)照表53-55
• 致謝55-56
• 膽管細(xì)胞性肝癌的診斷和預(yù)后血清標(biāo)志物（綜述）56-86
• References73-86

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 郝華;歐海玲;崔錦珠;;蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在肝癌研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2009年05期

  本文關(guān)鍵詞：人類(lèi)肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞系Hep G2和Li-7在裸鼠體內(nèi)成瘤研究及其血清蛋白譜分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：509972