本文關(guān)鍵詞：腫瘤條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞凋亡，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管生成,而腫瘤新生血管缺乏平滑肌層,血管的不穩(wěn)定性為腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移提供了條件。近年來,有關(guān)腫瘤血管生成的研究主要集中于腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用。腫瘤發(fā)生過程對(duì)血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)特性有何影響至今尚無研究報(bào)道。本研究采用腫瘤條件培養(yǎng)基(TCM)模擬腫瘤發(fā)生微環(huán)境,觀察腫瘤細(xì)胞對(duì)VSMC增殖的影響,并探討其分子機(jī)制,為抗腫瘤藥物的開發(fā)提供新思路和作用靶標(biāo)。方法與結(jié)果:1 TCM抑制VSMC增殖MTT分析與細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,不同濃度TCM孵育VSMC 24 h,VSMC增殖活力與細(xì)胞數(shù)量均明顯下降(P0.05),且隨TCM稀釋倍數(shù)增多,其對(duì)VSMC增殖活力與細(xì)胞數(shù)量的抑制作用減弱。2 TCM不影響VSMC中PCNA的表達(dá)為了確定VSMC增殖活力下降的機(jī)制,用Western blot檢測(cè)增殖標(biāo)志物PCNA(增殖細(xì)胞核抗原)。結(jié)果顯示,TCM孵育VSMC 24 h并未影響PCNA的表達(dá)。因此推測(cè),VSMC增殖活力的降低、細(xì)胞數(shù)量的減少,可能并非通過增殖抑制,而是凋亡誘導(dǎo)的結(jié)果。3 TCM誘導(dǎo)VSMC凋亡Annexin V-FITC/PI試劑盒可檢測(cè)細(xì)胞的早期、晚期凋亡活性,處理后的樣品可用流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡檢測(cè)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,TCM組的細(xì)胞凋亡高于對(duì)照組16.58±3.14%(P0.01),其中早期凋亡前者高于后者11.07±2.47%(P0.01),晚期凋亡前者高于后者5.51±0.79%(P0.01)。熒光顯微鏡結(jié)果也顯示,TCM組的細(xì)胞凋亡明顯高于對(duì)照組。JC-1試劑盒可檢測(cè)膜電位的改變,從而反映細(xì)胞的早期凋亡情況。熒光顯微鏡結(jié)果顯示,TCM組的早期細(xì)胞凋亡明顯高于對(duì)照組。TUNEL試劑盒可檢測(cè)細(xì)胞凋亡晚期過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。熒光顯微鏡結(jié)果顯示,TCM組的晚期細(xì)胞凋亡明顯高于對(duì)照組。4 TCM誘導(dǎo)VSMC中Caspase-3的活化Caspase-3為細(xì)胞凋亡關(guān)鍵執(zhí)行分子,正常以酶原(32KD)的形式存在于胞漿中,其在凋亡早期階段被激活,活化的Caspase-3由兩個(gè)大亞基(17KD)和兩個(gè)小亞基(12KD)組成,細(xì)胞凋亡的晚期和死亡細(xì)胞中,Caspase-3活性明顯下降。Western blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,TCM組的pro-Caspase-3表達(dá)量減少(P0.05),而cleaved-Caspase-3表達(dá)上調(diào)(P0.01)。表明TCM可誘導(dǎo)VSMC中Caspase-3的活化,進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。5 TCM誘導(dǎo)VSMC中Bax的表達(dá),抑制Bcl-2的表達(dá)Bcl-2家族的表達(dá)和調(diào)控是影響細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素之一,在細(xì)胞凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中發(fā)揮重要作用。Bcl-2和Bax分別是Bcl-2家族中最有代表性的抑制凋亡和促進(jìn)凋亡基因。Western blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,TCM組Bcl-2表達(dá)量減少,而Bax表達(dá)上調(diào),Bax/Bcl-2比率升高(P0.01)。表明TCM可通過增強(qiáng)Bax表達(dá)活性、下調(diào)Bcl-2誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。結(jié)論:1 TCM誘導(dǎo)VSMC凋亡,是腫瘤組織血管結(jié)構(gòu)異常的機(jī)制之一。2 TCM通過線粒體通路誘導(dǎo)VSMC凋亡,并涉及Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤條件培養(yǎng)基 血管平滑肌細(xì)胞 增殖 凋亡 Caspase-3 Bcl-2 Bax
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R73-3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10
• 材料與方法10-15
• 結(jié)果15-17
• 附圖17-22
• 附表22-23
• 討論23-25
• 結(jié)論25
• 參考文獻(xiàn)25-28
• 綜述 細(xì)胞外基質(zhì)與心血管疾病28-44
• 參考文獻(xiàn)37-44
• 致謝44-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45-46

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 張婷;蔣春雷;;腫瘤條件培養(yǎng)基對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖、黏附、遷移能力的調(diào)節(jié)[J];生理學(xué)報(bào);2011年03期

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4 胡美茹,蘭雨,張學(xué)敏,沈倍奮;Caspase與Bcl-2在凋亡發(fā)生和調(diào)控中的相互作用機(jī)制[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2000年02期

  本文關(guān)鍵詞：腫瘤條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞凋亡，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：503679