本文關(guān)鍵詞：SOCS3基因?qū)ψ訉m內(nèi)膜癌細胞增殖和遷移作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：世界范圍內(nèi),子宮內(nèi)膜癌是僅次于宮頸癌的女性生殖道惡性腫瘤,且其發(fā)病率呈上升趨勢。目前在西方這一腫瘤已成為女性生殖道腫瘤中最為常見的病種,占新發(fā)現(xiàn)婦科腫瘤的一半。一般而言,患者年齡在60至70歲之間,而一般女性一生中罹患子宮內(nèi)膜癌的風險在2.5%左右。90%子宮內(nèi)膜癌患者的臨床癥狀表現(xiàn)為絕經(jīng)后陰道流血,不過絕經(jīng)后的陰道流血患者中僅有10%最后確診為子宮內(nèi)膜癌,部分患者還可出現(xiàn)陰道流液,此類患者早期可僅表現(xiàn)為少量血性白帶,隨著疾病進展而發(fā)生嚴重感染時可出現(xiàn)膿血樣液體排出。絕經(jīng)前女性的首發(fā)癥狀則往往為月經(jīng)周期混亂,并有部分患者在宮頸涂片檢查中偶然發(fā)現(xiàn)異常子宮內(nèi)膜細胞。根據(jù)FIGO(2009)分期,子宮內(nèi)膜癌可分為4期：Ⅰ期指腫瘤局限于子宮體部,并進一步分為Ia期及Ib期,其中Ia期腫瘤浸潤深度小于子宮肌層二分之一,而Ib期腫瘤浸潤深度則已超過或等于子宮肌層的二分之一；Ⅱ期指腫瘤已侵犯宮頸間質(zhì),但尚無宮體外蔓延；Ⅲ期指腫瘤已有局部和(或)區(qū)域擴散,其中Ⅲa期指腫瘤已侵犯子宮漿膜層和(或)附件,Ⅲb期指腫瘤已侵犯陰道和(或)宮旁組織,Ⅲc期指盆腔淋巴結(jié)和(或)腹主動脈旁淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,Ⅲcl期指盆腔淋巴結(jié)陽性,Ⅲc2期指腹主動脈旁淋巴結(jié)陽性伴(或不伴)盆腔淋巴結(jié)陽性；Ⅳ期指腫瘤侵犯膀胱和(或)直腸粘膜,和(或)遠處轉(zhuǎn)移,Ⅳa期指腫瘤侵犯膀胱和(或)直腸粘膜,4b期腫瘤遠處轉(zhuǎn)移,包括腹腔內(nèi)和(或)腹股溝淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。80～90%屬于內(nèi)膜樣癌,按腺癌分化程度分為Ⅰ級(高分化G1),Ⅱ級(中分化G2),Ⅲ級(低分化G3)三級。對于子宮內(nèi)膜癌而言,其預后整體而言相對較好,且多數(shù)患者在就診時多處于疾病早期。影響預后的因素主要有：1、腫瘤的惡性程度及病變范圍,包括手術(shù)病理分期、組織學類型、腫瘤分級、肌層浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移及子宮外轉(zhuǎn)移等；2、患者全身狀況；3、治療方案的選擇。多數(shù)子宮內(nèi)膜癌的復發(fā)在手術(shù)治療后的2-3年內(nèi)出現(xiàn)。對于子宮內(nèi)膜癌的首選治療方式為手術(shù),手術(shù)目的是進行手術(shù)病理分期,確定病變范圍及手術(shù)預后相關(guān)因素,切除病變子宮及其他可能存在轉(zhuǎn)移的病灶,首先留取腹腔積液或盆腔沖洗液進行細胞學檢查,然后腹腔探查。如考慮存在子宮外部侵犯的患者,還需進行擴大的筋膜外子宮切除術(shù)及雙側(cè)輸卵管卵巢切除。同時,許多患者在術(shù)后為避免陰道穹窿的復發(fā)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等原因仍需接受輔助治療。在手術(shù)術(shù)式選擇中,目前已有充足證據(jù)支持使用腹腔鏡進行子宮切除術(shù)或者是腹腔鏡輔助下的經(jīng)陰道子宮切除術(shù)。放療也是常用的治療方式,這一治療既可用于術(shù)后的輔助治療,也可單獨作為不適宜接受手術(shù)患者的根治性治療,并且可應用于術(shù)后復發(fā)患者的局部治療。目前盡管術(shù)后輔助性放療可以改善局部復發(fā)控制情況,但對于患者的整體生存仍無明顯改善。與之相比,對于高�；颊叩脑缙诨熌壳吧袩o統(tǒng)一定論。目前認為子宮內(nèi)膜癌有兩種發(fā)病類型：雌激素依賴型(Ⅰ型)與(Ⅱ型)非雌激素依賴型,子宮內(nèi)膜癌絕大多數(shù)(80%)屬于Ⅰ型,該型往往繼發(fā)于子宮內(nèi)膜不典型增生。肥胖、不孕、胰島素抵抗以及長期無孕激素拮抗的應用雌激素治療等因素均與Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌發(fā)病相關(guān)。而Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌則包括子宮內(nèi)膜漿液性癌、透明細胞癌、腺鱗癌、粘液腺癌等類型,與雌激素作用無關(guān),癌灶容易擴散,預后較差。兩者在分子機制層面也各具特點。Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌通常具有PTEN抑癌基因、K-ras、Beta-catenin等基因的突變及錯配修復基因缺陷有關(guān)。而Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌多與p53抑癌基因的突變相關(guān)。可見子宮內(nèi)膜癌發(fā)病機制復雜,而具體發(fā)病的機理卻尚未明確闡明�？梢娔壳白訉m內(nèi)膜癌的治療仍充滿挑戰(zhàn),而對其致病分子機制的研究則可能使我們獲得更為有效、特異的治療方式。這其中針對調(diào)節(jié)腫瘤細胞增殖及遷移等與預后密切相關(guān)的分子信號通路的研究一直是子宮內(nèi)膜癌研究領(lǐng)域的中心問題。細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)家族在調(diào)節(jié)細胞的生長、分化等方面發(fā)揮重要作用,該家族在惡性腫瘤疾病中的作用已日益引起人們的關(guān)注。SOCS家族是1997年以來相繼被發(fā)現(xiàn)的JAK/STAT信號通路的主要負性調(diào)控因子家族,由SOCS1-SOCS7和CIS共8種成員組成,其結(jié)構(gòu)相似,由N區(qū)、中央?yún)^(qū)SH2結(jié)構(gòu)域和C端SOCS盒組成。目前對SOCS3的研究較為清楚,其廣泛表達于不同類型組織和細胞中。SOCS3基因(NM 003955.3)位于17q25.3, CDS區(qū)由675個連續(xù)的核苷酸組成,編碼225個氨基酸,編碼框的上游約1.1kb范圍內(nèi)是該基因的啟動子區(qū),其在人、大鼠、小鼠之間具有高度保守性,均由兩個STAT結(jié)合域、一個TAT框和一個GC富集區(qū)組成。SOCS-3基因的啟動子含有STAT1/STAT3和STAT5b的結(jié)合位點。這類因子主要與JAK/STAT信號傳導通路相互作用。SOCS-3是SOCS家族中研究最多的成員之一,已有研究提示多種腫瘤組織中SOCS3基因啟動子區(qū)CpG島存在高度甲基化,而基因啟動子區(qū)失活是導致抑癌基因失活的主要機制,SOCS3基因可能作為一個抑癌基因發(fā)揮作用。He首次于2003年發(fā)現(xiàn)了在人肺癌中SOCS3啟動子超甲基化導致其基因沉默,SOCS3蛋白表達缺失。Weber等報道的94例頭頸鱗狀細胞癌中僅有10例發(fā)現(xiàn)SOCS-3蛋白表達為陽性,且其中9例組織中SOCS-3啟動子CpG島呈超甲基化狀態(tài)。而將SOCS-3導入CAL-27細胞后發(fā)現(xiàn),過表達的SOCS-3能明顯抑制癌細胞生長。Cui等發(fā)現(xiàn)肝癌細胞中通過轉(zhuǎn)入SOCS-3可以抑制STAT3的磷酸化,并介導腫瘤細胞死亡。目前認為SOCS基因啟動子區(qū)域CpG島的異常高度甲基化是導致基因沉默的主要機制。而已知的SOCS3與JAK/STAT通路相互作用途徑主要有3種：①抑制JAK激酶活性阻斷JAK/STAT通路；②與細胞因子受體結(jié)合,拮抗STAT對活化受體的激活；③通過SOCS盒促進所結(jié)合蛋白發(fā)生蛋白酶體依賴途徑的降解。SOCS-3通過上述機制抑制STAT3磷酸化,負反饋抑制JAK/STAT3信號轉(zhuǎn)導通路,從而抑制了腫瘤的生長。而在與激素分泌相關(guān)的腫瘤中,SOCS-3則對腫瘤增殖起到促進作用。但近期對于卵巢癌的研究也提示腫瘤細胞中存在SOCS3,并可進一步激活STAT-3磷酸化,促進腫瘤細胞存活。而對于子宮內(nèi)膜癌而言,目前尚不確定SOCS家族在其發(fā)展中所起的作用。目的：探索子宮內(nèi)膜癌中SOCS-3的表達情況,以及其對子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細胞系增殖遷移能力的影響,評估SOCS3作為潛在治療靶點的可能性,探討其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的可能機制。從而為子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機制研究奠定基礎,為子宮內(nèi)膜癌的臨床預防及治療提供新的思路。方法：采用免疫組化染色法檢測正常子宮內(nèi)膜組織及子宮內(nèi)膜癌組織中的SOCS3表達情況,分析兩者間的表達差異,并進行統(tǒng)計分析。構(gòu)建SOCS3載體質(zhì)粒,以慢病毒包裝并轉(zhuǎn)染293T細胞擴增病毒,收取病毒液后對子宮內(nèi)膜癌細胞進行轉(zhuǎn)染以構(gòu)建SOCS3穩(wěn)定表達的子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細胞系,以空載體HEC-1B細胞系作為對照。對兩組HEC-1B細胞進行單克隆培養(yǎng),QPCR鑒定SOCS3穩(wěn)定細胞系SOCS3表達情況。之后分別提取蛋白,BCA法行蛋白定量,SDS電泳轉(zhuǎn)膜后行免疫反應,并利用化學發(fā)光進行顯影、定影以觀察兩種細胞中SOCS3的表達情況。之后應用EdU標記法及MTT實驗比較SOCS3穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞與空載體對照細胞增殖水平,以流式細胞計數(shù)比較兩者細胞周期情況,并以Transwell法檢測兩種細胞遷移能力的差別。結(jié)果：免疫組化結(jié)果提示SOCS3在腫瘤組織中的表達明顯低于正常子宮內(nèi)膜組織,正常子宮內(nèi)膜組織與子宮內(nèi)膜癌組織中強陽性表達率分別為90%(18/20)和31.9%(43/135),兩組之間差異具有統(tǒng)計學意義(X2=16.860,P0.001)。利用慢病毒包裝的SOCS3載體與空載體分別成功轉(zhuǎn)染了兩組HEC-1B細胞,對其進行傳代培養(yǎng),熒光染色、QPCR及Western Blot鑒定結(jié)果提示SOCS3穩(wěn)定表達細胞系成功建立。EdU標記法測定提示,與空載體對照組相比,SOCS3穩(wěn)定表達細胞系EdU標記減少,提示其DNA合成活動減弱,細胞增殖速度低。而MTT實驗則進一步支持了這一結(jié)論。通過對兩組細胞在第1至7天吸光度比較,兩者自第5天開始細胞數(shù)量出現(xiàn)明顯差別,SOCS3穩(wěn)定表達HEC-1B細胞系細胞數(shù)量低于空載體對照組。其差別具有統(tǒng)計學意義。流式細胞儀對細胞周期進行檢測提示SOCS3穩(wěn)定表達細胞多停滯于G0/G1期,S期及G2期細胞數(shù)量降低。Transwell實驗則進一步提示SOCS3穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞遷移能力降低。結(jié)論：SOCS3在子宮內(nèi)膜癌組織中低表達,而在SOCS3穩(wěn)定表達的子宮內(nèi)膜癌細胞系中,相比于空載體對照細胞,其增殖能力與遷移能力均有所下降。這一結(jié)果提示SOCS3可能在子宮內(nèi)膜癌中起到抑制癌癥發(fā)生發(fā)展的作用,而子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病可能與SOCS3的表達受抑制相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：SOCS3 子宮內(nèi)膜癌 細胞增殖 細胞遷移
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-14
• 前言14-18
• 第一部分 穩(wěn)定過表達SOCS3子宮內(nèi)膜癌細胞株的構(gòu)建18-45
• 1 實驗材料18-22
• 2 實驗方法22-24
• 3、酶切位點及PCR引物24-25
• 4、PCR擴增25-28
• 5、SOCS3基因擴增產(chǎn)物酶切,載體酶切,連接,轉(zhuǎn)化28-29
• 6、人SOCS3基因克隆鑒定29
• 7、質(zhì)粒提取29-31
• 8、慢病毒制備31-35
• 9、病毒液感染人HEC-1B子宮內(nèi)膜腺癌細胞35-36
• 10、穩(wěn)定細胞系檢測36-40
• 11、WESTERN BLOT驗證40-41
• 12、實驗結(jié)果41-45
• 第二部分 SOCS3基因?qū)ψ訉m內(nèi)膜癌細胞功能的影響45-56
• 1、實驗材料45-47
• 2、實驗方法47-50
• 3、統(tǒng)計學分析50
• 4、實驗結(jié)果50-56
• 全文討論56-65
• 參考文獻65-73
• 全文總結(jié)73-75
• 縮寫詞簡表75-78
• 攻讀學位期間成果78-79
• 致謝79-81

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;Gene Delivery of SOCS3 Protects Mice from Lethal Endotoxic Shock[J];Cellular & Molecular Immunology;2005年05期

2 周運恒;榮光華;楊再興;仲人前;;SOCS及其免疫學作用研究進展[J];現(xiàn)代免疫學;2007年06期

3 張奇;吳健;于波;;SOCS1與免疫調(diào)節(jié)的研究進展[J];免疫學雜志;2010年11期

4 丁浩;孫國芳;李菊香;洪葵;程曉曙;;SOCS1對氧化低密度脂蛋白促進人血管平滑肌細胞增殖作用的影響[J];嶺南心血管病雜志;2011年S1期

5 張四洋;;Expression of SOCS3 and Pyk2 and their correlation in non-small cell lung cancer[J];China Medical Abstracts(Internal Medicine);2012年04期

6 陳建芳;姚忠祥;;SOCS家族在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的研究進展[J];生理科學進展;2006年02期

7 王文琦;孫麗洲;;SOCS3與妊娠相關(guān)疾病的研究進展[J];江蘇醫(yī)藥;2014年04期

8 于鴻;劉玉俠;賈艷華;陳軍;;SOCS1調(diào)節(jié)樹突狀細胞抗腫瘤免疫的研究進展[J];中國免疫學雜志;2009年06期

9 秦偉;陸惠娜;黃濱濱;修冰;薄蘭君;傅建非;;SOCS1與經(jīng)典型慢性骨髓增殖性腫瘤關(guān)系的研究[J];同濟大學學報(醫(yī)學版);2011年01期

10 梁瀟;賀明;陳濤;惠智艷;袁祖貽;;大鼠SOCS3腺病毒的構(gòu)建及鑒定[J];陜西醫(yī)學雜志;2011年11期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Zhiyao Bao;Quirui Zhang;Huanying Wan;Min Zhou;Ping He;;Expression of SOCS-1 in the peripheral blood from patients with idiopathic pulmonary fibrosis[A];中華醫(yī)學會呼吸病學年會——2013第十四次全國呼吸病學學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

2 徐雪;李娟;王亞軍;;家雞細胞因子信號傳導抑制因子(SOCS1)基因的克隆及其組織表達[A];四川省動物學會第九次會員代表大會暨第十屆學術(shù)研討會論文集[C];2011年

3 王國兵;李成榮;楊軍;溫鵬強;賈實磊;;SOCS1/SOCS3甲基化改變在兒童急性ITP Th17/Treg細胞失衡中的作用初探[A];中華醫(yī)學會第十七次全國兒科學術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2012年

4 許衍碩;陳志斌;梁艷冰;唐皓;馬中富;;外周血單個核細胞SOCS-1表達與MODS患者預后關(guān)系的研究[A];全國危重病急救醫(yī)學學術(shù)會議論文匯編[C];2007年

5 許衍碩;陳志斌;梁艷冰;唐皓;馬中富;;外周血單個核細胞SOCS-1表達與MODS患者預后關(guān)系的研究[A];2008年廣東省中醫(yī)熱病、急癥、中西醫(yī)結(jié)合急救、危重病、災害醫(yī)學學術(shù)會議學術(shù)論文集[C];2008年

6 譚峰;方美鳳;梁艷桂;劉曉林;陳文霖;;急性腦梗塞患者血清SOCS-3的動態(tài)變化及其意義[A];國家中醫(yī)藥管理局腦病重點研究室建設研討會暨中風病科研成果推廣交流會論文匯編[C];2010年

7 夏杰;步宏;石毓君;孫懷強;包驥;;部分肝切除后肝再生過程中SOCS3基因啟動子甲基化檢測[A];中華醫(yī)學會病理學分會2010年學術(shù)年會日程及論文匯編[C];2010年

8 陳志斌;梁艷冰;唐皓;林賢壽;何東華;馬中富;;外周血單個核細胞SOCS-1與SOCS-3表達與MODS患者預后關(guān)系的研究[A];2008年廣東省中醫(yī)熱病、急癥、中西醫(yī)結(jié)合急救、危重病、災害醫(yī)學學術(shù)會議學術(shù)論文集[C];2008年

9 劉霞;張永亮;安華章;徐紅梅;于益芝;楊曉;曹雪濤;;SOCS3反饋抑制巨噬細胞內(nèi)源性TGF-β1負向調(diào)節(jié)TLR4反應的作用和機制研究[A];中國免疫學會第五屆全國代表大會暨學術(shù)會議論文摘要[C];2006年

10 李菊香;萬磊;夏子榮;蘇海;顏素娟;程曉曙;吳清華;;細胞因子信號抑制物SOCS1/JAB介導CT-1對心肌胞急性缺氧復氧損傷的保護作用[A];江西省第四次中西醫(yī)結(jié)合心血管學術(shù)交流會論文集[C];2008年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 本報特約撰稿人 陸志城;SOCS3：抗過敏反應藥物的新靶標[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周運恒;SOCS在原發(fā)性膽汁性肝硬化發(fā)病機制中的作用研究[D];第二軍醫(yī)大學;2009年

2 邢長英;補腎益氣方調(diào)控人早孕滋養(yǎng)細胞SOCS3表達改善其生物學功能的研究[D];復旦大學;2006年

3 張沛;SOCS3在心臟移植慢性排斥反應中的作用和機制研究[D];華中科技大學;2014年

4 白莉;SOCS3基因?qū)θ毖醮笫蠓蝿用}平滑肌細胞增殖及細胞癌基因表達的影響[D];第三軍醫(yī)大學;2004年

5 王晨;JAK/STAT信號通路抑制因子SOCS-1/3對糖尿病腎病作用及其機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2008年

6 豆玉鳳;負載全腫瘤抗原及SOCS1siRNA轉(zhuǎn)染的樹突狀細胞殺傷兒童惡性腫瘤細胞的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

7 劉青娟;炎癥在糖尿病腎病發(fā)病中的作用及細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子SOCS-1、SOCS-3的影響[D];河北醫(yī)科大學;2010年

8 廖立紅;SOCS干預對IUGR大鼠骨骼肌細胞代謝的影響及機制研究[D];華中科技大學;2011年

9 呂曉輝;STAT3及SOCS3信號分子在肝前體細胞增殖分化過程中的作用[D];中國醫(yī)科大學;2007年

10 張四洋;SOCS3及PYK2對非小細胞肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用研究[D];中國醫(yī)科大學;2008年

  本文關(guān)鍵詞：SOCS3基因?qū)ψ訉m內(nèi)膜癌細胞增殖和遷移作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：503469