發(fā)布時間：2017-06-29 15:22

  本文關(guān)鍵詞：酒精應(yīng)激通過激活Wnt-β-catenin信號通路誘發(fā)EMT促進肝癌細胞的惡性進展，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[研究背景]肝癌在惡性腫瘤中,不僅發(fā)病率高,且主要集中在亞洲。在中國惡性腫瘤的死亡率中,肝癌高居第二。近年來,隨著醫(yī)療技術(shù)條件的改善,腫瘤病人的存活率有所提高,但是肝癌的發(fā)病率和死亡率仍然很高,引起肝癌發(fā)生發(fā)展的原因和機制仍然不是很清楚。大量研究表明：慢性應(yīng)激,如慢性炎癥、重金屬污染、過度飲酒等與腫瘤發(fā)展密切相關(guān)。酒精已經(jīng)被證實是促進肝癌進展的危險因素之一但是關(guān)于酒精是如何促進肝癌細胞生長和轉(zhuǎn)移的機制仍然不清楚。上皮樣細胞向間質(zhì)樣細胞轉(zhuǎn)化的過程,叫做EMT (epithelial-mesenchymal transition)。在腫瘤的發(fā)展過程中,EMT使良性的腫瘤細胞浸潤到周圍組織中,并且轉(zhuǎn)移到遠處的組織。轉(zhuǎn)移是90%的腫瘤病人死亡的主要原因。EMT與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān),研究發(fā)現(xiàn)Wnt-β-catenin信號通路可以調(diào)節(jié)EMT,而在肝癌細胞中酒精應(yīng)激是否通過激活Wnt-β-catenin信號通路誘發(fā)EMT從而促進肝癌細胞的生長和轉(zhuǎn)移尚未有明確報道。研究報道,一種可以靶向殺死腫瘤干細胞的藥物鹽霉素是Wnt-β-catenin信號通路的抑制劑,于是我們設(shè)想,是否可以通過使用鹽霉素抑制Wnt-β-catenin信號通路從而逆轉(zhuǎn)酒精誘導的EMT。本研究擬探索低濃度的酒精慢性應(yīng)激是否通過激活Wnt-β-catenin信號通路誘發(fā)EMT促進肝癌細胞的惡性進展,并且探究通過使用鹽霉素抑制Wnt-β-catenin信號通路是否可以逆轉(zhuǎn)酒精誘導的EMT。[研究方法].為了探討慢性酒精應(yīng)激對肝癌細胞惡性進展的影響和機制,本研究用0.2%的酒精長期處理人肝癌細胞HepG2和SMMC-7721,構(gòu)建慢性酒精誘導的肝癌細胞模型,通過體外的細胞行為學實驗檢測低濃度酒精長期慢性處理對肝癌細胞克隆形成能力,集落形成能力、遷移能力的影響；通過體內(nèi)的裸鼠成瘤實驗及飲酒小鼠模型的構(gòu)建來檢測酒精對肝癌細胞體內(nèi)成瘤能力的影響。于此同時,通過Western blot檢測酒精刺激肝癌細胞后EMT相關(guān)maker (E-cadherin, Vimentin, β-catenin, MMP-3,MMP-9)的表達情況。通過Western blot、免疫熒光、免疫組化實驗檢測Wnt-β-catenin信號通路相關(guān)分子的激活情況。并且,通過Salinomycin處理肝癌細胞,Western blot檢測Wnt-β-catenin信號通路的抑制情況以及EMT相關(guān)maker的變化。最后,通過體外的細胞行為學實驗和體內(nèi)的裸鼠成瘤實驗,驗證Salinomycin對酒精促進的肝癌細胞發(fā)生EMT的抑制作用。[研究結(jié)果]本研究成功構(gòu)建了慢性酒精應(yīng)激的肝癌細胞模型和肝癌動物模型。發(fā)現(xiàn)慢性酒精應(yīng)激在體外促進了肝癌細胞的克隆形成能力、集落形成能力和遷移能力,并且抑制了肝癌細胞由化療藥物引起的細胞凋亡；慢性酒精應(yīng)激在體內(nèi)促進了肝癌細胞的裸鼠成瘤能力。同時,我們通過采用慢性酒精應(yīng)激的肝癌動物模型,發(fā)現(xiàn)慢性飲酒促進了肝癌細胞在裸鼠體內(nèi)的生長和轉(zhuǎn)移。在機制研究方面,我們發(fā)現(xiàn)酒精應(yīng)激可以通過誘發(fā)EMT促進肝癌細胞的生長和轉(zhuǎn)移,在肝癌細胞中酒精應(yīng)激激活了Wnt-β-catenin信號通路,并且發(fā)現(xiàn)Salinomycin通過抑制Wnt-β-catenin信號通路可以在一定程度上逆轉(zhuǎn)酒精誘導的EMT。[結(jié)論](1)慢性酒精應(yīng)激促進了肝癌細胞的生長和遷移,抑制了肝癌細胞的凋亡。(2)慢性酒精應(yīng)激促進了肝癌細胞的裸鼠成瘤能力；慢性飲酒促進了肝癌細胞在裸鼠體內(nèi)的生長和轉(zhuǎn)移。(3)在肝癌細胞中酒精應(yīng)激激活了Wnt-β-catenin信號通路。(4)EMT可能參與了酒精應(yīng)激促進的肝癌細胞惡性進展,Salinomycin通過抑制Wnt-β-catenin信號通路在一定程度上逆轉(zhuǎn)了酒精誘導的EMT。
【關(guān)鍵詞】：酒精 肝癌 遷移 EMT(epithelial to mesenchymal transition) Wnt-β-catenin 鹽霉素
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中英文縮寫一覽表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 1. 前言11-12
• 2. 材料與方法12-20
• 3. 結(jié)果20-39
• 4. 討論39-41
• 5. 結(jié)論41
• 6. 參考文獻41-51
• 附錄51-53
• 致謝53-54
• 綜述54-83
• 參考文獻65-83

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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  本文關(guān)鍵詞：酒精應(yīng)激通過激活Wnt-β-catenin信號通路誘發(fā)EMT促進肝癌細胞的惡性進展，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：498396