發(fā)布時(shí)間：2017-06-28 10:14

  本文關(guān)鍵詞：抑制人SOST基因表達(dá)的腺病毒構(gòu)建及其對間接共培養(yǎng)體系中MG-63細(xì)胞的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建靶向抑制人骨硬化蛋白SOST的siRNA腺病毒,探究SOST基因在乳腺癌骨質(zhì)破壞這一病理過程中的作用。方法1.設(shè)計(jì)帶3個(gè)干擾片段的2對引物,擴(kuò)增出兩段PCR產(chǎn)物,以Gibson DNA Assembly的方式同時(shí)連接到腺病毒穿梭質(zhì)粒pAdTrace-OK上。穿梭載體經(jīng)與腺病毒骨架質(zhì)粒同源重組,獲得腺病毒質(zhì)粒。該質(zhì)粒再經(jīng)HEK-293細(xì)胞包裝獲得SOST-siRNA腺病毒。以該病毒感染MDA-MB-231細(xì)胞,RT-PCR、ELISA檢測其干擾效率。2.將MG-63成骨細(xì)胞與MDA-MB-231細(xì)胞間接共培養(yǎng),以模擬乳腺癌細(xì)胞骨轉(zhuǎn)移,同時(shí)采用Ad-siSOST腺病毒抑制MDA-MB-231細(xì)胞相應(yīng)蛋白表達(dá),檢測MG-63細(xì)胞成骨能力的改變。結(jié)果1.成功獲得帶三個(gè)干擾片段的腺病毒穿梭質(zhì)粒,經(jīng)同源重組和包裝后,獲得腺病毒AdR-siSOST。感染乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231后,能夠明顯抑制SOST的表達(dá)。2.與MDA-MB-231細(xì)胞共培養(yǎng)后,MG-63細(xì)胞成骨能力下降,說明在乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的微環(huán)境中,乳腺癌細(xì)胞可抑制成骨細(xì)胞的成骨分化;轉(zhuǎn)染Ad-siSOST腺病毒后,其成骨能力好轉(zhuǎn),說明在這一過程中有SOST基因的參與。結(jié)論1.成功構(gòu)建具有較高干擾效率的腺病毒AdR-siSOST。2.sclerostin蛋白參與了乳腺癌骨轉(zhuǎn)移,阻斷SOST的表達(dá),可有效改善乳腺癌引起的骨質(zhì)破壞。
【關(guān)鍵詞】：SOST 腺病毒 乳腺癌 骨轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 參考文獻(xiàn)9-11
• 第一節(jié)“一步法”快速構(gòu)建干擾人SOST基因RNA表達(dá)的腺病毒11-26
• 1 實(shí)驗(yàn)材料11-12
• 2 實(shí)驗(yàn)方法12-21
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-23
• 4 討論23-24
• 參考文獻(xiàn)24-26
• 第二節(jié) AD-SISOST腺病毒對間接共培養(yǎng)體系中MG-63 細(xì)胞的影響26-34
• 1 實(shí)驗(yàn)材料26
• 2 實(shí)驗(yàn)方法26-28
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-30
• 4 討論30-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 總結(jié)34-35
• 文獻(xiàn)綜述35-43
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 致謝43-44
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文44

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李清,查曉,于湘暉,姜春來,吳永革,孔維;條件復(fù)制腺病毒的構(gòu)建[J];生命的化學(xué);2005年02期

2 柯為;;腺病毒與癌癥的研究[J];生物工程學(xué)報(bào);2007年01期

3 高立紅;;腺病毒55型感染疫情應(yīng)對效果分析[J];護(hù)理管理雜志;2012年10期

4 ;新型腺病毒的分析結(jié)果證明其有可能預(yù)測未來的眼病原體[J];透析與人工器官;2012年04期

5 ;由一例“急�！辈∪搜是环蛛x出一株“腺病毒”的報(bào)導(dǎo)[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);1979年02期

6 楊娟娟;;苛求的腺病毒40型在體外復(fù)制的電鏡研究[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊);1985年02期

7 陳元鼎,戴國珍,李軍,徐維明,孫茂勝,丁雪鳳,王麗春,蘇曄,杜丹萍;樹

本文編號：493473