發(fā)布時(shí)間：2017-06-28 03:02

  本文關(guān)鍵詞：葫蘆素D與葫蘆素I對(duì)T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞作用的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：T細(xì)胞淋巴瘤是一種來(lái)源于T細(xì)胞的惡性增殖性疾病。2008年WHO淋巴瘤新分類標(biāo)準(zhǔn)中T細(xì)胞部分包括T-淋巴母細(xì)胞白血病/淋巴瘤和成熟T/NK細(xì)胞淋巴瘤兩大類,后者又包括結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤,外周T細(xì)胞淋巴瘤,成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤等多個(gè)類型。T細(xì)胞淋巴瘤在全球都有發(fā)病,且發(fā)病率呈現(xiàn)明顯的地區(qū)差異,中國(guó)、日本、韓國(guó)等亞洲國(guó)家和北美地區(qū)發(fā)病率明顯高于其他地區(qū)。T細(xì)胞淋巴瘤發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚,異質(zhì)性強(qiáng),不同亞型臨床表現(xiàn)各異,分型和診斷一直存在爭(zhēng)議。相比B細(xì)胞淋巴瘤,T細(xì)胞淋巴瘤惡性程度更高,進(jìn)展迅速,預(yù)后差,目前尚無(wú)針對(duì)本病統(tǒng)一的最佳治療方案,亟待新藥的開(kāi)發(fā)。葫蘆素(cucurbitacin)是從葫蘆科和十字花科中提取的四環(huán)三萜類化合物,具有退熱、陣痛、抗炎、抗菌、抗腫瘤等作用。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)不同,葫蘆素家族被分為葫蘆素A到T共17個(gè)亞型。葫蘆素B、D、E、I因抗瘤作用顯著被廣泛研究。其中葫蘆素D與葫蘆素I化學(xué)結(jié)構(gòu)相似,僅有兩處不同:一處不同是葫蘆素D結(jié)構(gòu)中C1與C2之間為單鍵,葫蘆素I相應(yīng)位置為雙鍵;另一處不同為空間構(gòu)型差異。具有抗癌活性的葫蘆素可以引起細(xì)胞周期阻滯,生長(zhǎng)抑制和凋亡,分子機(jī)制涉及多種信號(hào)通路。葫蘆素抗腫瘤作用機(jī)制與其化學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。所在課題組一直致力于葫蘆素D抗腫瘤機(jī)制的研究,發(fā)現(xiàn)葫蘆素D可通過(guò)抑制NF-κB活化,降低抗凋亡蛋白Bcl-xl和Bcl-2表達(dá),誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡。本課題通過(guò)對(duì)比研究葫蘆素D(cucurbitacin D,Cu D)和葫蘆素I(cucurbitacin I,Cu I)對(duì)T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的作用,分析其化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗癌機(jī)制的關(guān)系,為相關(guān)藥物開(kāi)發(fā)及T細(xì)胞淋巴瘤治療提供參考。主要研究?jī)?nèi)容如下:第一部分比較葫蘆素D與葫蘆素I對(duì)小鼠T細(xì)胞淋巴瘤EL4細(xì)胞增殖的影響及其作用機(jī)制目的:比較葫蘆素D和葫蘆素I對(duì)小鼠T細(xì)胞淋巴瘤EL4細(xì)胞的作用,分析其化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗癌機(jī)制的關(guān)系,為相關(guān)藥物開(kāi)發(fā)及T細(xì)胞淋巴瘤治療提供參考。方法:1小鼠T細(xì)胞淋巴瘤EL4細(xì)胞在DMEM培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng),每24~48小時(shí)傳代,實(shí)驗(yàn)均使用對(duì)數(shù)期細(xì)胞。2 Cell Titer-Glo#174;熒光細(xì)胞活性檢測(cè)法檢測(cè)并比較葫蘆素D與葫蘆素I對(duì)小鼠T細(xì)胞淋巴瘤EL4細(xì)胞增殖的影響:分別用葫蘆素D和葫蘆素I刺激細(xì)胞,觀察藥物刺激組細(xì)胞對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響,Cell Titer-Glo#174;熒光細(xì)胞活性法檢測(cè)細(xì)胞活性。3 Western Blot法檢測(cè)并比較葫蘆素D與葫蘆素I對(duì)小鼠T細(xì)胞淋巴瘤EL4細(xì)胞凋亡的影響:葫蘆素D與葫蘆素刺激EL4細(xì)胞,提取細(xì)胞總蛋白,Western Blot法檢測(cè)并比較對(duì)照組及葫蘆素D、葫蘆素I刺激后EL4細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白PARP與Caspase-3活化及表達(dá)情況。4 Western Blot法檢測(cè)并比較葫蘆素D與葫蘆素I在小鼠T細(xì)胞淋巴瘤EL4細(xì)胞中對(duì)NF-κB p65活化的影響:葫蘆素D與葫蘆素刺激EL4細(xì)胞,提取細(xì)胞總蛋白,Western Blot法檢測(cè)并比較對(duì)照組及葫蘆素D、葫蘆素I刺激后EL4細(xì)胞內(nèi)NF-κB p65活化及表達(dá)情況。結(jié)果:1 Cell Titer-Glo#174;熒光細(xì)胞活性檢測(cè)法結(jié)果顯示葫蘆素D與葫蘆素I對(duì)小鼠T細(xì)胞淋巴瘤EL4細(xì)胞增殖均有抑制作用,作用具有時(shí)間-劑量依賴性,且葫蘆素I對(duì)EL4細(xì)胞增殖的抑制作用強(qiáng)于葫蘆素D(P0.05)。2 Western Blot法結(jié)果顯示葫蘆素D與葫蘆素I可使小鼠T細(xì)胞淋巴瘤EL4細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-PARP,Cleaved-caspase-3表達(dá)增加,且葫蘆素I作用強(qiáng)于葫蘆素D(P0.05)。3葫蘆素D與葫蘆素I可以抑制NF-κB p65活化,且葫蘆素I作用強(qiáng)于葫蘆素D(P0.05)。結(jié)論:1葫蘆素D與葫蘆素I可抑制小鼠T細(xì)胞淋巴瘤EL4細(xì)胞NF-κB p65磷酸化激活,活化caspase-3和PARP誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞增殖。2葫蘆素I對(duì)EL4細(xì)胞抑制作用強(qiáng)于葫蘆素D。第二部分 比較葫蘆素D與葫蘆素I 對(duì)人T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株及T細(xì)胞淋巴瘤患者和健康志愿者外周血淋巴細(xì)胞的影響目的:比較葫蘆素D和葫蘆素I對(duì)人T細(xì)胞淋巴瘤Hu T78,Hu T102,MT-2,MT-4細(xì)胞,T細(xì)胞淋巴瘤患者及健康志愿者外周血淋巴細(xì)胞的作用,進(jìn)一步評(píng)價(jià)葫蘆素D和葫蘆素I用于T細(xì)胞淋巴瘤治療的價(jià)值。方法:1人T細(xì)胞淋巴瘤Hu T78,Hu T102,MT-2,MT-4細(xì)胞在DMEM培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng),每24~48小時(shí)傳代,實(shí)驗(yàn)均使用對(duì)數(shù)期細(xì)胞。2 Cell Titer-Glo#174;熒光細(xì)胞活性檢測(cè)法檢測(cè)并比較葫蘆素D與葫蘆素I對(duì)Hu T78,Hu T102,MT-2,MT-4細(xì)胞增殖的影響:分別用葫蘆素D和葫蘆素I刺激細(xì)胞,Cell Titer-Glo#174;熒光細(xì)胞活性法檢測(cè)細(xì)胞活性。3 T細(xì)胞淋巴瘤患者及健康志愿者外周血淋巴細(xì)胞分離:取T細(xì)胞淋巴瘤患者及健康志愿者外周血12~20m L,Lympholyte法分離淋巴細(xì)胞。4 Cell Titer-Glo#174;熒光細(xì)胞活性檢測(cè)法檢測(cè)并比較葫蘆素D與葫蘆素I對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞增殖的影響:分別用葫蘆素D和葫蘆素I刺激細(xì)胞,Cell Titer-Glo#174;熒光細(xì)胞活性法檢測(cè)細(xì)胞活性。結(jié)果:1葫蘆素D與葫蘆素I可抑制人T細(xì)胞淋巴瘤Hu T78,Hu T102,MT-2,MT-4細(xì)胞增殖,且葫蘆素I對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用強(qiáng)于葫蘆素D(P0.05)。2葫蘆素D與葫蘆素I可抑制T細(xì)胞淋巴瘤患者外周血淋巴細(xì)胞增殖(P0.05),而對(duì)健康志愿者外周血淋巴細(xì)胞無(wú)抑制作用(P0.05)。結(jié)論:1葫蘆素D與葫蘆素I可抑制人T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株Hu T78,Hu T102,MT-2,MT-4及T細(xì)胞淋巴瘤患者外周血淋巴細(xì)胞增殖,葫蘆素I作用強(qiáng)于葫蘆素D。2葫蘆素D與葫蘆素I可抑制T細(xì)胞淋巴瘤患者外周血淋巴細(xì)胞增殖,而相同濃度刺激對(duì)健康志愿者外周血淋巴細(xì)胞增殖無(wú)抑制作用。第二部分比較葫蘆素D與葫蘆素I對(duì)人T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株及T細(xì)胞淋
【關(guān)鍵詞】：T細(xì)胞淋巴瘤 葫蘆素D 葫蘆素I 細(xì)胞凋亡 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 引言12-14
• 第一部分 比較葫蘆素D與葫蘆素I對(duì)小鼠T細(xì)胞淋巴瘤EL4細(xì)胞增殖的影響及其作用機(jī)制14-38
• 前言14-15
• 材料與方法15-19
• 結(jié)果19-22
• 附圖22-28
• 附表28-32
• 討論32-34
• 小結(jié)34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 第二部分 比較葫蘆素D與葫蘆素I對(duì)人T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株及T細(xì)胞淋巴瘤患者和健康志愿者外周血淋巴細(xì)胞的影響38-58
• 前言38-39
• 材料與方法39-41
• 結(jié)果41-43
• 附圖43-50
• 附表50-54
• 討論54-55
• 小結(jié)55-56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 結(jié)論58-59
• 綜述 NF-κB：聯(lián)系慢性炎癥與腫瘤的關(guān)鍵分子59-66
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 致謝66-67
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李小秋;李甘地;高子芬;周小鴿;朱雄增;;中國(guó)淋巴瘤亞型分布:國(guó)內(nèi)多中心性病例10002例分析[J];診斷學(xué)理論與實(shí)踐;2012年02期

  本文關(guān)鍵詞：葫蘆素D與葫蘆素I對(duì)T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞作用的比較研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：492216