本文關(guān)鍵詞：miR-92a在前列腺癌中的表達(dá)及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的了解miRNA-92a在前列腺癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)水平,探討miRNA-92a異常表達(dá)對前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,并對其可能的分子機(jī)制進(jìn)行探索。方法收集天津市泌尿外科研究所保存的接受前列腺癌根治性切除術(shù)的100例前列腺癌(Pca)患者組織標(biāo)本及行TUR-P的60例良性前列腺增生(BPH)患者的樣本組織,分別提取總RNA,進(jìn)一步RT-qPCR方法檢測在Pca和BPH組織中miRNA-92a的表達(dá)水平,并對其檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。選取天津市泌尿外科研究所前列腺疾病研究室凍存的各種前列腺癌細(xì)胞系和正常前列腺上皮細(xì)胞系,包括PC3、C4-2和LNCaP 3種前列腺癌細(xì)胞系以及RWPE-1 1種正常前列腺上皮細(xì)胞系。分別提取總RNA,進(jìn)一步RT-qPCR方法檢測并驗(yàn)證在PC3、C4-2、LNCaP及RWPE-1四種細(xì)胞系中miRNA-92a的表達(dá)水平,并對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。通過在前列腺癌細(xì)胞系內(nèi)轉(zhuǎn)染miRNA-92a mimic、miRNA-92a inhibitor及其對照,并檢測細(xì)胞的增殖能力、凋亡和周期的變化。利用生物信息學(xué)方法,選取miRanda、TargetScan、PicTar3種靶基因預(yù)測軟件均可測到的交集基因,進(jìn)一步在Search miRò中預(yù)測與疾病相關(guān)性,從而初步篩選出可能與腫瘤相關(guān)的靶基因,并通過RT-qPCR方法檢測各靶基因mRNA的表達(dá)水平。從而探討異常表達(dá)的miRNA-92a在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。結(jié)果與良性前列腺增生組織相比,miR-92a在前列腺癌組織中的mRNA相對表達(dá)水平顯著增高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。通過RT-PCR方法檢測人正常前列腺上皮細(xì)胞系RWPE-1和三種前列腺癌細(xì)胞系(PC3、LNCap、C4-2)中miRNA-92a的表達(dá),發(fā)現(xiàn)在PC3細(xì)胞系中miRNA-92a的表達(dá)量相對其它細(xì)胞系明顯上調(diào)。利用Lipo2000轉(zhuǎn)染miRNA-92a mimic和miRNA-92a inhibitor及其陰性對照至PC3細(xì)胞系,提取轉(zhuǎn)染24小時(shí)后細(xì)胞RNA,行RT-PCR檢測,結(jié)果顯示miRNA-92a mimic和miRNA-92a inhibitor轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞后,能較明顯上調(diào)及下調(diào)miRNA-92a的表達(dá)水平。在PC3細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染miRNA-92a mimic、miRNA-92a inhibitor及其對照后,發(fā)現(xiàn)在上調(diào)miRNA-92a的表達(dá)后能顯著提高細(xì)胞的增殖能力,反之下調(diào)其表達(dá)后細(xì)胞的增殖能力受到抑制;上調(diào)miRNA-92a的表達(dá)后PC3細(xì)胞的凋亡率明顯低于其陰性對照組,而下調(diào)其表達(dá)后細(xì)胞的凋亡率要高于其陰性對照組;上調(diào)miRNA-92a的表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞從G0/G1期進(jìn)入S期,而下調(diào)mi RNA-92a后,細(xì)胞在G0/G1期較對照組明顯阻滯,并伴隨S期細(xì)胞減少。利用生物信息學(xué)方法,選取miRanda、TargetScan、PicTar3種靶基因預(yù)測軟件均可測到的交集基因共210個(gè),進(jìn)一步在Search miRò中預(yù)測與疾病相關(guān)性篩選出可能與腫瘤相關(guān)的靶基因10個(gè)(IRS2、MTA3、BACH1、FASLG、EBAG9、SMAD7、PTK2、POLK、EZH2、FLI1)。結(jié)論前列腺癌組織中miRNA-92a水平顯著高于良性前列腺增生組織;前列腺癌細(xì)胞系LNCap、C4-2和PC-3中mi RNA-92a水平顯著高于正常前列腺細(xì)胞RWPE-1;mi RNA-92a高表達(dá)后可顯著提高PC-3細(xì)胞的增殖能力,抑制細(xì)胞凋亡,并可促進(jìn)細(xì)胞從G0/G1期進(jìn)入S期;而miRNA-92a低表達(dá)可顯著降低細(xì)胞增殖能力,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,使細(xì)胞阻滯在G0/G1期;miRNA-92a在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著類似癌基因的作用,隨著研究的不斷深入,尋找到其直接作用的靶基因,將來必能對其復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制進(jìn)行更全面的闡述。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 miR-92a 生物學(xué)行為 RT-qPCR
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略語/符號說明9-10
• 前言10-14
• 研究現(xiàn)狀、成果10-13
• 研究目的、方法13-14
• 對象和方法14-30
• 結(jié)果30-40
• 討論40-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明46-47
• 綜述47-60
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 致謝60

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1 陳曉博;miR-92a在前列腺癌中的表達(dá)及意義[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號：491425