發(fā)布時(shí)間：2017-06-27 20:09

  本文關(guān)鍵詞：GSK-3β對(duì)TRAIL誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1)驗(yàn)證抑制GSK-3β的表達(dá)后可影響肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。2)探討抑制GSK-3β的表達(dá)對(duì)TRAIL誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡的影響及作用機(jī)制。方法:分別構(gòu)建慢病毒載體攜帶sh GSK-3β(shGSK-3β)以及腺病毒載體攜帶TRAIL(Ad5.TRAIL)。將Hep G2細(xì)胞隨機(jī)分為三組:空白對(duì)照組,sh RNA處理組,sh GSK-3β處理組。分別利用定量PCR和Western Blot技術(shù)檢測(cè)GSK-3β在三組細(xì)胞中的m RNA水平和蛋白質(zhì)水平,并用MTT技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的活性。將Hu H-7細(xì)胞分為四組:空白對(duì)照組,GSK-3β抑制劑處理組,Ad5.TRAIL處理組,兩者混合處理組。分別用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)四組細(xì)胞的凋亡情況。此外,抑制GSK-3β的表達(dá)后,用Western blot技術(shù)分別檢測(cè)NF-κB通路的下游蛋白Bcl-x L和c IAP2的表達(dá)。將Hu H-7細(xì)胞隨機(jī)分為五組:a)空白對(duì)照組,b)Ad5.TRAIL和sh Bcl-x L處理組,c)Ad5.TRAIL和shc IAP2處理組,d)Ad5.TRAIL,sh Bcl-x L和GSK-3β抑制劑處理組,e)Ad5.TRAIL,shc IAP2和GSK-3β抑制劑處理組,用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)五組細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)果:1)與對(duì)照組相比,sh GSK-3β明顯下調(diào)了GSK-3β在Hep G2細(xì)胞系中的表達(dá)(P0.05),并且有效抑制了Hep G2細(xì)胞的生長(zhǎng)(P0.05)。2)加入GSK-3β抑制劑后明顯增強(qiáng)了Ad5.TRAIL誘導(dǎo)的Hu H-7細(xì)胞的凋亡作用(P0.05)。加入GSK-3β抑制劑減少了Bcl-x L和c IAP2的表達(dá)(P0.05),且下調(diào)Bcl-x L和c IAP2表達(dá)后,d組的凋亡明顯高于其他四組(P0.05)。結(jié)論:1)抑制GSK-3β的表達(dá)可抑制肝癌細(xì)胞的增殖。2)抑制GSK-3β的表達(dá)可增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡,并且可通過(guò)NF-κB通路介導(dǎo)。
【關(guān)鍵詞】：GSK-3β 凋亡 TRAIL NF-κB 肝癌
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-5
• 引言5-7
• 第1章 材料與方法7-14
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料7-8
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象7
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑7
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器7-8
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法8-13
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和感染8-9
• 1.2.2 細(xì)胞增殖檢測(cè)9-10
• 1.2.3 實(shí)時(shí)定量PCR10-11
• 1.2.4 Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)11-12
• 1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)12-13
• 1.3 統(tǒng)計(jì)分析13-14
• 第2章 結(jié)果14-20
• 2.1 GSK-3β 下調(diào)抑制肝癌細(xì)胞的增殖14-15
• 2.2 GSK-3β 抑制劑增強(qiáng)TRAIL誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡15-17
• 2.3 GSK-3β 調(diào)節(jié)NF-κ B下游蛋白17-18
• 2.4 下調(diào)Bcl-xL增強(qiáng)GSK-3β 抑制劑對(duì)TRAIL誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡18-20
• 第3章 討論20-22
• 結(jié)論22-23
• 參考文獻(xiàn)23-26
• 綜述 GSK-3β對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展26-41
• 綜述參考文獻(xiàn)34-41
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果41-42
• 致謝42-43

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