本文關(guān)鍵詞：感染紅色熒光蛋白肝癌細(xì)胞的實驗研究及雙色熒光示蹤肝癌原位移植瘤模型的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過慢病毒感染建立穩(wěn)定高表達(dá)紅色熒光蛋白(RFP)的人肝癌細(xì)胞Hep G2/RFP和鼠肝癌細(xì)胞Hepa1-6/RFP,并探討肝癌細(xì)胞感染前后的一些基本生物學(xué)和遺傳學(xué)特性是否受到影響。方法:將同時載有紅色熒光蛋白(RFP)基因及嘌呤霉素抗性基因的慢病毒感染人肝癌細(xì)胞Hep G2及鼠肝癌細(xì)胞Hepa1-6,然后經(jīng)嘌呤霉素篩選獲得的細(xì)胞分別命名為Hep G2/RFP、Hepa1-6/RFP。在熒光顯微鏡下觀察感染后的細(xì)胞形態(tài);Hep G2/RFP、Hepa1-6/RFP細(xì)胞體外傳代培養(yǎng)30代,通過流式細(xì)胞術(shù)(FACS)檢測傳代30代前后細(xì)胞感染RFP的陽性率;采用PCR檢測肝癌細(xì)胞基因組中RFP基因的表達(dá)情況;通過CCK-8法、Transwell細(xì)胞侵襲實驗、染色體分析實驗,Western-blot實驗比較感染前后肝癌細(xì)胞的增殖曲線、侵襲力、染色體核型及數(shù)目、相關(guān)蛋白AFP的表達(dá)水平等變化情況。結(jié)果:經(jīng)嘌呤霉素篩選后,兩肝癌細(xì)胞紅色熒光蛋白的感染率都高達(dá)98%以上;PCR結(jié)果證實RFP基因成功整合至肝癌細(xì)胞中;肝癌細(xì)胞感染前后細(xì)胞的增殖曲線、侵襲力、染色體的核型及數(shù)目、相關(guān)蛋白AFP的相對表達(dá)量幾乎沒有改變。結(jié)論:本實驗建立的人肝癌細(xì)胞Hep G2/RFP及鼠肝癌細(xì)胞Hepa1-6/RFP既能穩(wěn)定高表達(dá)RFP,又可以保持其原有的基本生物學(xué)及遺傳學(xué)特性不變,為進(jìn)一步進(jìn)行肝癌追蹤性研究及治療提供了一個有用的新工具。目的:建立紅、綠雙色熒光示蹤的肝癌原位移植瘤模型,并初步分析其基本特征。方法:將穩(wěn)定高表達(dá)紅色熒光蛋白的人肝癌細(xì)胞Hep G2/RFP和鼠肝癌細(xì)胞Hepa1-6/RFP接種于全身表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)的裸小鼠肝右葉,建立雙色熒光示蹤的肝癌原位移植瘤模型。采用活體熒光成像儀實時動態(tài)觀察移植瘤的生長轉(zhuǎn)移情況,然后取肝癌組織作連續(xù)冰凍切片,取肝癌原代組織培養(yǎng),并在顯微鏡下觀察移植瘤的組織結(jié)構(gòu)特征。結(jié)果:成功建立了紅、綠雙色熒光示蹤的肝癌原位移植瘤模型,建模成功率為100%。實時活體成像可檢測到早期腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移,紅色腫瘤團(tuán)塊隨著移植時間的延長而增大、增多,并從肝區(qū)向肝外組織遷移。在熒光顯微鏡下觀察移植瘤切片,不僅直觀顯示了重構(gòu)的肝癌組織區(qū)域有大量的綠色宿主細(xì)胞和紅色腫瘤細(xì)胞交織在一起,而且肝癌細(xì)胞的侵襲、遷移及肝癌細(xì)胞與宿主細(xì)胞的融合等也清晰可見,甚至可以精確到單個細(xì)胞水平。常規(guī)HE染色基本符合肝癌的基本特征。Hepa1-6/RFP肝癌原代組織的培養(yǎng)也證實了融合細(xì)胞參與了肝癌組織“重構(gòu)體”的組成。結(jié)論:雙色熒光示蹤的肝癌原位移植瘤模型能夠在活體內(nèi)觀察腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移,清fc顯示腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞的位置和相互作用關(guān)系,為研究腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移和腫瘤微環(huán)境在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用提供了-個新的可視化實驗平臺。與傳統(tǒng)模型相比較,具有更高的實用價值。
【關(guān)鍵詞】：紅色熒光蛋白 肝癌細(xì)胞 慢病毒 肝細(xì)胞癌 雙色熒光示蹤 原位移植模型 活體熒光成像系統(tǒng) 細(xì)胞融合
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 序言10-15
• 參考文獻(xiàn)13-15
• 第一部分 感染紅色熒光蛋白肝癌細(xì)胞的實驗研究15-29
• 引言15
• 材料與方法15-21
• 結(jié)果21-26
• 討論26-27
• 參考文獻(xiàn)27-29
• 第二部分 雙色熒光示蹤肝癌原位移植瘤模型的建立29-40
• 引言29
• 材料與方法29-31
• 結(jié)果31-36
• 討論36-38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 綜述 熒光蛋白在腫瘤研究中的應(yīng)用進(jìn)展40-51
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文51-52
• 中英文對照縮略詞表52-53
• 致謝53-54

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6 李運紅邋胡顏;國內(nèi)首次從壁虎中分離出抗腫瘤活性成分[N];科技日報;2007年

7 劉道安邋運紅 胡顏;我國學(xué)者從壁虎中分離出抗腫瘤活性成分[N];中國醫(yī)藥報;2007年

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  本文關(guān)鍵詞：感染紅色熒光蛋白肝癌細(xì)胞的實驗研究及雙色熒光示蹤肝癌原位移植瘤模型的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：481079