本文關(guān)鍵詞：LAMA4及相關(guān)IncRNA在前列腺癌組織中的差異表達(dá)，，以及其對(duì)前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:利用微陣列基因芯片技術(shù)檢測(cè)前列腺癌(PCa)、和癌旁正常組織中差異表達(dá)的m RNA和lnc RNA。觀察前列腺癌與癌旁正常組織基因表達(dá)的變化,進(jìn)而發(fā)現(xiàn)LAMA4基因及其相應(yīng)lnc RNA,為前列腺癌轉(zhuǎn)移提供分子層面的新證據(jù),以期為臨床前列腺癌的預(yù)防、診療,以及發(fā)病機(jī)制提供新理論及新方案。方法:收集2013年8月至2014年8月我院前列腺切除術(shù)后臨床組織標(biāo)本共20例,通過改進(jìn)標(biāo)本獲取方式,運(yùn)輸途徑,破碎方法三方面因素,建立從離體組織標(biāo)本提取高質(zhì)量總RNA的方法。隨后在此方法基礎(chǔ)上,通過冰凍切片結(jié)合手工顯微切割技術(shù)在同一前列腺組織標(biāo)本中分離出PCa、癌旁正常組織各區(qū)域的純凈細(xì)胞群。采用lnc RNA+m RNA表達(dá)譜芯片分析三者間的基因表達(dá)差異(生物學(xué)重復(fù)3次),通過生物信息學(xué)的方法篩選出具有顯著表達(dá)差異的m RNA和lnc RNA,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行Pathway分析等初步的生物信息學(xué)分析,反向Cis-預(yù)測(cè)lnc RNA的靶基因,在發(fā)生顯著變化的炎癥和/或癌癥通路上建立lnc RNA與靶基因的基因網(wǎng)絡(luò)圖。確定LAMA4及其相關(guān)lnc RNA的差異表達(dá),并通過收取2014年11月至2015年10月我院前列腺切除術(shù)后臨床組織標(biāo)本6例,進(jìn)行組織標(biāo)本PCR驗(yàn)證,培養(yǎng)DU145前列腺癌細(xì)胞系,22RV1前列腺癌細(xì)胞系,使用特異性si RNA,以Lipofectamine TM2000進(jìn)行轉(zhuǎn)染,進(jìn)一步采取q RT-PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果,以確定是否轉(zhuǎn)染成功。對(duì)于轉(zhuǎn)染后抑制的細(xì)胞,通過transwell,劃痕實(shí)驗(yàn)以及MTT法細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn),檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的遷移,轉(zhuǎn)移,黏附探尋lnc RNA在此過程中的作用。結(jié)果:1.基因表達(dá)譜芯片的結(jié)果顯示:人前列腺癌組織與癌旁正常組織對(duì)照相比,有2610個(gè)m RNA表達(dá)有差異,其中上調(diào)689個(gè),下調(diào)1921個(gè);同時(shí)有2176個(gè)lnc RNA表達(dá)有差異,其中上調(diào)688個(gè),下調(diào)1488個(gè)。人前列腺增生性炎性萎縮組織與癌旁正常組織相比,有592個(gè)m RNA表達(dá)有差異,其中上調(diào)183個(gè),下調(diào)409個(gè);同時(shí)有575個(gè)lnc RNA表達(dá)有差異,其中上調(diào)160個(gè),下調(diào)415個(gè)。人前列腺癌組織與前列腺增生性炎性萎縮組織相比,有1007個(gè)m RNA表達(dá)有差異,其中上調(diào)115個(gè),下調(diào)892個(gè);有773個(gè)lnc RNA表達(dá)有差異,其中上調(diào)105個(gè),下調(diào)668個(gè)。在3種組織類型的共同比較中,有113個(gè)m RNA的表達(dá)存在顯著線性差異,其中上調(diào)8個(gè),下調(diào)105個(gè);有106個(gè)lnc RNA的表達(dá)也存在顯著線性差異,其中上調(diào)11個(gè),下調(diào)95個(gè)。2.LAMA4基因的m RNA及其lnc RNA在芯片結(jié)果中差異表達(dá)明顯,在組織標(biāo)本中,組織PCR結(jié)果符合芯片結(jié)果。3.轉(zhuǎn)染后細(xì)胞PCR顯示,si RNA敲底lnc RNA和LAMA4 m RNA水平4.細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,轉(zhuǎn)染后細(xì)胞遷移轉(zhuǎn)移能力明顯減弱。結(jié)論:1.冰凍切片并HE染色結(jié)合“排除法”手工顯微切割技術(shù),可經(jīng)濟(jì)、有效地鑒定分離出目的細(xì)胞亞群,且通過Trizol法提取的總RNA能夠滿足高通量微陣列技術(shù)的質(zhì)量要求。2.前列腺癌組織驗(yàn)證符合芯片結(jié)果,LAMA4及其相關(guān)lnc RNA在前列腺癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織(P0.05)3.RT-PCR和細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)證明,轉(zhuǎn)染后細(xì)胞LAMA4 m RNA和相應(yīng)lnc RNA均下調(diào),并抑制細(xì)胞遷移,轉(zhuǎn)移,黏附的功能。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 LAMA4 非編碼RNA 轉(zhuǎn)移 黏附
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-14
• 第2章 材料與方法14-25
• 2.1 研究對(duì)象14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)分組14
• 2.3 主要儀器及試劑14-16
• 2.3.1 主要儀器14-15
• 2.3.2 主要試劑15-16
• 2.4 主要溶液配制16
• 2.4.1 H&E染液配置16
• 2.4.2 Trizol16
• 2.4.3 培養(yǎng)基的配置16
• 2.4.4 MTT試劑的配制16
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法16-25
• 2.5.1 標(biāo)本的收集與保存16-17
• 2.5.2 前列腺癌組織與癌旁正常組織的鑒定及分離17
• 2.5.3 Trizol法提取癌組織及癌旁正常組織的總RNA17-18
• 2.5.4 RNA濃度測(cè)定18
• 2.5.5 引物設(shè)計(jì)18-19
• 2.5.6 逆轉(zhuǎn)錄c DNA19
• 2.5.7 Real-time PCR檢測(cè)lnc RNA RP1-142L7.5 的表達(dá)水平19-20
• 2.5.8 細(xì)胞培養(yǎng)20-21
• 2.5.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)染21-22
• 2.5.10 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RP1-142L7.5 對(duì)DU145，22RV1細(xì)胞的影響22-23
• 2.5.11 MTT法檢測(cè)RP1-142L7.5 對(duì)DU145，22RV1細(xì)胞黏附的影響23
• 2.5.12 Transwell檢測(cè)RP1-142L7.5 對(duì)DU145，22RV1細(xì)胞侵襲能力的影響23-25
• 第3章 結(jié)果25-42
• 3.1 鏡下組織學(xué)表現(xiàn)25-26
• 3.1.1 正常前列腺上皮的鏡下表現(xiàn)25-26
• 3.1.2 PCa組織的病理表現(xiàn)26
• 3.2 芯片結(jié)果26-35
• 3.2.1 基因表達(dá)譜雜交圖26-27
• 3.2.2 基因表達(dá)譜散點(diǎn)圖27-28
• 3.2.3 基因表達(dá)差異28-29
• 3.2.4 聚類分析29-30
• 3.2.5 KEGG分析30-32
• 3.2.6 以m RNA為入口的反向lnc RNA預(yù)測(cè)32-34
• 3.2.7 選取基因34-35
• 3.3 RT-PCR對(duì)RP1-142L7.5 大樣本進(jìn)行驗(yàn)證35-37
• 3.4 si RNA干擾后RP1-142L7.5 的表達(dá)鑒定37
• 3.5 si RNA干擾后對(duì)下游LAMA4基因的影響37-38
• 3.6 Lnc RNA RP1-142L7.5 對(duì)細(xì)胞遷移功能的影響38-40
• 3.7 Lnc RNA RP13-650J16.1 對(duì)細(xì)胞黏附功能的影響。40
• 3.8 Lnc RNA RP13-650J16.1 對(duì)細(xì)胞體外侵襲能力的影響40-42
• 第4章 討論42-46
• 4.1 LAMA4在腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮的作用42-44
• 4.2 lnc RNA與m RNA之間和蛋白表達(dá)的關(guān)系44-46
• 第5章 結(jié)論46-47
• 致謝47-48
• 參考文獻(xiàn)48-58
• 綜述 雄激素受體剪切變異體解析58-70
• 參考文獻(xiàn)66-70

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本文編號(hào)：478526