本文關(guān)鍵詞：TAMs對(duì)食管癌相關(guān)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移能力的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的食管癌是消化系統(tǒng)比較常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,對(duì)人類(lèi)的生命與健康產(chǎn)生極大的危害。我國(guó)食管癌的發(fā)病率高居于世界首位,80%的患者發(fā)病年齡在50歲以后,男性高于女性。近幾年來(lái)食管癌的發(fā)病年齡逐漸趨于年輕化。在我國(guó)食管癌的發(fā)病地區(qū)具有明顯的地域性,特別是在太行山脈附近的省份發(fā)病率明顯偏高。由于早期食管癌臨床癥狀并不明顯,患者多在出現(xiàn)吞咽困難、咽下疼痛時(shí)才就診,確診時(shí)往往已經(jīng)到了中晚期,且多發(fā)生了淋巴道轉(zhuǎn)移,治療效果欠佳。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumor associated macrophages,TAMs)是腫瘤組織中作用最強(qiáng)及數(shù)量最多的炎性細(xì)胞。目前根據(jù)巨噬細(xì)胞的活化狀態(tài)和在機(jī)體中發(fā)揮功能的不同,巨噬細(xì)胞主要分為M1型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞。M1型巨噬細(xì)胞可殺滅腫瘤細(xì)胞并抑制腫瘤淋巴管及血管形成,而M2型巨噬細(xì)胞主要促進(jìn)腫瘤淋巴管及血管生成。已知的促進(jìn)淋巴管生成的主要調(diào)控因子是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C),其可與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞表面的特異性受體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3)結(jié)合,誘導(dǎo)其發(fā)生酪氨酸激酶磷酸化,從而促進(jìn)腫瘤周?chē)碌牧馨凸苌?為腫瘤淋巴道的轉(zhuǎn)移提供了通道。除了腫瘤細(xì)胞可分泌VEGF-C,腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞也可分泌�；贛1型與M2型巨噬細(xì)胞的作用不同,本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)體外培養(yǎng)人單核細(xì)胞,將其誘導(dǎo)成M2型巨噬細(xì)胞,并繼續(xù)誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞觀察是否向M1型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化。將人單核細(xì)胞系THP-1細(xì)胞分別誘導(dǎo)為M1型和M2型巨噬細(xì)胞并與食管癌相關(guān)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞(lymphatic endothelial cell,LEC)共培養(yǎng),以單獨(dú)培養(yǎng)的食管癌相關(guān)LEC作為對(duì)照組;通過(guò)CCK-8法、Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)及基質(zhì)膠三維培養(yǎng)法觀察不同類(lèi)型的巨噬細(xì)胞對(duì)食管癌相關(guān)LEC的增殖、遷徙和成環(huán)能力的影響,同時(shí)通過(guò)ELISA法來(lái)檢測(cè)不同類(lèi)型巨噬細(xì)胞分泌VEGF-C的情況;通過(guò)Western Blot法檢測(cè)食管癌相關(guān)LEC經(jīng)條件培養(yǎng)基培養(yǎng)后VEGFR-3蛋白表達(dá)情況;通過(guò)q RT-PCR法來(lái)檢測(cè)VEGFR-3m RNA的表達(dá)情況,探討M2型巨噬細(xì)胞能否向M1型轉(zhuǎn)化,及探討不同類(lèi)型的巨噬細(xì)胞對(duì)食管癌相關(guān)LEC增殖、遷移和成環(huán)能力的影響。方法1誘導(dǎo)人單核細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化,并誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞向M1型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化1)采用密度梯度離心法及磁珠陽(yáng)性分選法獲得人單核細(xì)胞,經(jīng)重組人巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)化為M2型巨噬細(xì)胞,并采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行鑒定。2)M2型巨噬細(xì)胞經(jīng)干擾素-γ(IFN-γ)和磷酸脂多糖(LPS)共同誘導(dǎo)向M1型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化,并采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行鑒定。2將M1型和M2型巨噬細(xì)胞與食管癌相關(guān)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)并檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)1)將THP-1細(xì)胞經(jīng)佛波酯(PMA)誘導(dǎo)2d后,經(jīng)IFN-γ和LPS誘導(dǎo)2d為M1型巨噬細(xì)胞;經(jīng)白介素-4(IL-4)誘導(dǎo)2d為M2型巨噬細(xì)胞,采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行鑒定。2)分別留取M1型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞的條件培養(yǎng)基。3)以M1型巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的食管癌相關(guān)LEC作為M1組;以M2型巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的食管癌相關(guān)LEC作為M2組;以RM1640完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的食管癌相關(guān)LEC作為對(duì)照組。4)采用CCK-8法檢測(cè)各組不同培養(yǎng)基對(duì)食管癌相關(guān)LEC的增殖能力的影響。5)采用Transwell小室來(lái)觀察各組不同培養(yǎng)基培養(yǎng)對(duì)食管癌相關(guān)LEC遷移能力的影響。6)采用基質(zhì)膠法來(lái)觀察各組不同培養(yǎng)基培養(yǎng)對(duì)食管癌相關(guān)LEC成環(huán)能力的影響。7)采用ELISA法檢測(cè)M1型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞上清液中VEGF-C水平。8)采用Western Blot法檢測(cè)各組不同培養(yǎng)基培養(yǎng)后的食管癌相關(guān)LEC中VEGFR-3蛋白表達(dá)水平。9)采用q RT-PCR法檢測(cè)各組不同培養(yǎng)基培養(yǎng)培養(yǎng)后的食管癌相關(guān)LEC中VEGFR-3m RNA表達(dá)情況。3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行處理數(shù)據(jù)。對(duì)于兩樣本定量資料我們選用t檢驗(yàn)。對(duì)于單因素定量資料多組樣本之間的比較我們采用單因素方差分析法,多組均數(shù)之間的兩兩比較則采用LSD-t法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)ɑ=0.05。結(jié)果1.經(jīng)M-CSF誘導(dǎo)后M2型巨噬細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率為(66.37±2.67)%,明顯多于M1型巨噬細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率(13.37±4.41)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而M2型巨噬細(xì)胞再經(jīng)IFN-γ和LPS誘導(dǎo)后M1型巨噬細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)率為(48.57±5.98)%,明顯高于M2型巨噬細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)率(25.83±1.95)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且M1型巨噬細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)量較單核細(xì)胞經(jīng)M-CSF誘導(dǎo)后明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.THP-1細(xì)胞經(jīng)PMA誘導(dǎo)后,經(jīng)IFN-γ與LPS誘導(dǎo)為M1型巨噬細(xì)胞;經(jīng)IL-4誘導(dǎo)為M2型巨噬細(xì)胞。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)M1型巨噬細(xì)胞的CD16陽(yáng)性表達(dá)率為(73.57±2.58)%,M2型巨噬細(xì)胞的CD163陽(yáng)性表達(dá)率為(86.3±2.66)%。3.CCK-8法檢測(cè)各組不同培養(yǎng)基對(duì)食管癌相關(guān)LEC增殖能力的影響:各組增殖能力M2組對(duì)照組M1組,M2組與M1組及與對(duì)照組兩兩比較差異具顯著性(P0.05)。而對(duì)照組與M1組進(jìn)行比較差異無(wú)顯著性(P0.05)。4.Transwell小室觀察各組不同培養(yǎng)基對(duì)食管癌相關(guān)LEC遷移能力的影響:各組穿膜細(xì)胞數(shù)M2組對(duì)照組M1組,M2組與M1組及與對(duì)照組兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)照組與M1組進(jìn)行比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.基質(zhì)膠實(shí)驗(yàn)法三維培養(yǎng)觀察各組不同培養(yǎng)基培養(yǎng)對(duì)食管癌相關(guān)LEC成環(huán)能力的影響:各組的成環(huán)數(shù)M2組對(duì)照組M1組,M2組與M1組及與對(duì)照組兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)照組與M1組進(jìn)行比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.ELISA法檢測(cè)M1型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞上清液中VEGF-C的水平結(jié)果:M2組對(duì)照組M1組,M2組與M1組及與對(duì)照組兩兩比較差異具顯著性(P0.05)。而對(duì)照組與M1組進(jìn)行比較差異無(wú)顯著性(P0.05)。7.Western Blot法檢測(cè)各組不同培養(yǎng)基培養(yǎng)后的食管癌相關(guān)LEC中VEGFR-3蛋白表達(dá)水平:M2組對(duì)照組M1組,M2組與M1組及與對(duì)照組兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)照組與M1組進(jìn)行比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。8.采用q RT-PCR法檢測(cè)各組不同培養(yǎng)基培養(yǎng)后的食管癌相關(guān)LEC中VEGFR-3m RNA表達(dá)水平:M2組VEGFR-3m RNA表達(dá)量是對(duì)照組的3.01倍,M1組是對(duì)照組的0.90倍。M2組與對(duì)照組及與M1組兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),對(duì)照組與M1組進(jìn)行比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.人M2型巨噬細(xì)胞經(jīng)IFN-γ和LPS誘導(dǎo)可向M1型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化。2.M2型巨噬細(xì)胞可促進(jìn)食管癌相關(guān)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,遷移及成環(huán)能力,而M1型巨噬細(xì)胞則對(duì)其遷移和成環(huán)能力起抑制作用。3.M2型巨噬細(xì)胞可通過(guò)分泌VEGF-C,進(jìn)而促進(jìn)食管癌相關(guān)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和成環(huán)能力。
【關(guān)鍵詞】：食管癌相關(guān)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞 M1型巨噬細(xì)胞 M2型巨噬細(xì)胞 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-15
• 中英文縮略詞表15-16
• 前言16-19
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法19-37
• 結(jié)果37-45
• 討論45-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-54
• 附圖54-57
• 綜述 巨噬細(xì)胞極化分型信號(hào)通路及對(duì)疾病影響的研究進(jìn)展57-74
• 參考文獻(xiàn)69-74
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷74-75
• 致謝75

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 韓偉;王正彩;周敏;顧云鶴;胡成乙;張淑君;吳紅梅;齊蕾;周秋鋒;王瑞芬;管雯斌;王立峰;;胃癌中TAMs與血管生成及轉(zhuǎn)移相關(guān)性的分析[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年30期

2 王興芬;鄭海燕;潘彥珞;董淑惠;辛琪;;胃癌組織中趨化因子MCP-1的表達(dá)與TAMs計(jì)數(shù)及腫瘤血管生成的相關(guān)性[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2010年03期

3 鄭海燕;王興芬;潘彥珞;董淑惠;辛琪;;胃癌組織中MCP-1、MMP-9的表達(dá)與間質(zhì)中TAMs浸潤(rùn)的關(guān)系[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2010年03期

4 ;[J];;年期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李柳葉;連花湯對(duì)與TAMs共培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞TLR4/MyD88信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 蘇崇宇;IL-6誘導(dǎo)的TAMs與胃癌淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)性的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 陳金艷;TAMs對(duì)食管癌相關(guān)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移能力的影響[D];鄭州大學(xué);2016年

3 袁虎勤;胃癌TAMs浸潤(rùn)與淋巴管形成及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D];蘭州大學(xué);2007年

4 孫亞楠;乳腺癌組織中HIF-2α、TAMs、VEGF-C的表達(dá)及其與淋巴道轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究[D];蘭州大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：TAMs對(duì)食管癌相關(guān)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移能力的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：476508