本文關(guān)鍵詞：C225-GNPs對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞放射增敏作用的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：原發(fā)性肝癌患者大多具有病毒性肝炎、肝硬化病史,在此基礎(chǔ)上行肝癌放療易引起腫瘤周圍正常肝組織損傷,放射性肝損傷(1adiation-induced liver disease, RILD)發(fā)生率增加。另外,由于受到肝臟周圍正常組織耐受劑量限制,使得肝癌靶照射劑量難以達(dá)d到根治性劑量。因此,如何在常規(guī)照射劑量下,增加肝癌放療敏感性及靶區(qū)生物劑量沉積成為肝癌放射治療亟待解決的臨床難題。研究目的：制備符合實(shí)驗(yàn)要求具有EGFR靶向性的納米金顆粒,用于體外放射治療研究,研究C225-GNPs聯(lián)合兆伏級(jí)X射線對(duì)EGFR高表達(dá)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的體外放射增敏效應(yīng),并從細(xì)胞周期改變、細(xì)胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑探討C225-GNPs的放射增敏機(jī)制。研究方法：首先運(yùn)用檸檬酸還原法合成尺徑20nm納米金,運(yùn)用靜電吸附形成Au-S、 Au-N合成C225-金納米共軛物。采用透射電鏡、紫外分光光度儀、動(dòng)態(tài)光散射儀以及酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)兩種納米材料進(jìn)行表征；GNPs、 C225-GNPs與SMMC-7721細(xì)胞共培養(yǎng)24h后,電鏡下觀察兩組細(xì)胞對(duì)納米顆粒的攝取,將EGFR高表達(dá)SMMC-7721細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),利用CCK-8法檢測(cè)不同濃度下(GNPs、 C225-GNPs 對(duì) SMMC-7721細(xì)胞的增殖抑制作用,繪制細(xì)胞增殖抑制曲線,計(jì)算IC50值。選用1/5IC50濃度的GNPs、 C225-GNPs與細(xì)胞共培養(yǎng)24h后進(jìn)行6MVX線照射(照射劑量為：0、0.5、1、2、4、6Gy),采用平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)研究GNPs、 C225-GNPs的放射增敏效應(yīng),利用單擊多靶模型繪制細(xì)胞存活曲線,求出D0、Dq等相關(guān)放射生物學(xué)參數(shù),計(jì)算放射增敏比(SER)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期改變。蛋白印跡法檢測(cè)相關(guān)凋亡蛋白及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白。研究結(jié)果：透射電鏡顯示實(shí)驗(yàn)合成的C225-GNPs大小均勻,分散性良好。探針表面蛋白經(jīng)磷鎢酸染色,粒子表面可見一層薄薄的白色光圈。偶聯(lián)抗體并使用蛋白封閉多余位點(diǎn)后,顆粒粒徑一定程度增大,提示蛋白包被成功。平均單個(gè)納米金顆粒表面偶聯(lián)94.65個(gè)抗體,C225-GNPs性質(zhì)較穩(wěn)定。電鏡結(jié)果顯示C225-GNPs較GNPs在EGFR高表達(dá)SMMC-7721細(xì)胞中有更多沉積,且在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)沉積明顯。利用不同濃度GNPs、 C225-GNPs處理細(xì)胞后,C225-GNPs對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用較明顯,IC50分別為6.14μg/ml、 4.11μg/ml,通過平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)計(jì)算放射增敏比(Do/Do)分別為1.54、1.66,放射增敏比(Dq/Dq)分別為1.38、1.85。流式細(xì)胞儀檢測(cè)提示C225-GNPs聯(lián)合X射線較GNPs組,細(xì)胞凋亡率明顯增加；C225-GNPs聯(lián)合X射線與GNPs組相比,G2/M期細(xì)胞比例增加(P0.05)。蛋白印跡法檢測(cè)結(jié)果提示C225-GNPs組較空白對(duì)照組,C225-GNPs聯(lián)合X射線組較單純照射組,細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)下降,Bax、 Caspase-3蛋白表達(dá)均有增加(P0.05)。GRP78、 IREa均增加,PERK則呈下降趨勢(shì)(P0.05)。結(jié)論：C225-GNPs聯(lián)合6MV X線較GNPs對(duì)EGFR高表達(dá)SMMC-7721細(xì)胞有更強(qiáng)的放射增敏作用,其機(jī)制可能為增加了射線對(duì)細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期同步化,可能與激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑促進(jìn)凋亡相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：納米金 C225-納米金 SMMC-7721細(xì)胞 放射增敏
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-14
• 前言14-17
• 參考文獻(xiàn)16-17
• 文獻(xiàn)綜述 金納米在腫瘤治療中的應(yīng)用17-25
• 參考文獻(xiàn)22-25
• 主要實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑25-29
• 1、實(shí)驗(yàn)細(xì)胞25
• 2、主要儀器設(shè)備25-26
• 3、主要試劑26-27
• 4、主要試劑配制27-29
• 實(shí)驗(yàn)方法29-46
• 1. C225-GNPs的合成29
• 2. C225-GNPs表征鑒定29-32
• 3. 細(xì)胞的培養(yǎng)32-33
• 4. PCR檢測(cè)SMMC-7721、HepG2細(xì)胞EGFR表達(dá)33-36
• 5. SMMC-7721細(xì)胞對(duì)GNPs、C225-GNPs攝取36
• 6. CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖抑制作用36-37
• 7. 放射增敏實(shí)驗(yàn)（集落形成法）37-38
• 8. Annexin V-FITC/PI檢測(cè)細(xì)胞凋亡38
• 9. 細(xì)胞周期分布檢測(cè)38-39
• 10. 蛋白印記法檢測(cè)Caspase-3、Bax、Bcl-2表達(dá)39-43
• 11. 蛋白印記法檢測(cè)IRE1α、PERK、GRP78/Bip表達(dá)43-45
• 12 統(tǒng)計(jì)方法45-46
• 結(jié)果46-54
• 1 C225-GNPs表征鑒定46-47
• 2 C225-GNPs放射增敏作用及機(jī)制47-54
• 討論54-58
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 結(jié)論61-62
• 已發(fā)表論文62-63
• 作者簡(jiǎn)介63-64
• 致謝64-65

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：476033