本文關(guān)鍵詞：FoxC1在鼻咽癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)及其與EMT相關(guān)分子標(biāo)志物關(guān)系的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:檢測鼻咽癌組織和細(xì)胞中FoxC1的表達(dá)情況。初步探討沉默F(xiàn)oxC1基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞CNE2生物學(xué)行為的影響。初步分析FoxC1與EMT相關(guān)分子標(biāo)志物相關(guān)性。方法:(1)采用組織芯片及免疫組化技術(shù)檢測93例鼻咽癌組織標(biāo)本和33例慢性鼻咽炎性組織標(biāo)本中FoxC1的表達(dá)。(2)采用Western blot法檢測FoxC1在鼻咽癌細(xì)胞株6-10B、5-8F、CNE1、CNE2和永生化鼻咽上皮細(xì)胞株NP69中的表達(dá)情況,篩選出FoxC1表達(dá)最高的細(xì)胞株。(3)通過FoxC1siRNA沉默鼻咽癌細(xì)胞CNE2中FoxC1的表達(dá),采用Western blot法檢測FoxC1沉默效果。(4)采用MTT法、DAPI細(xì)胞核染色法檢測FoxC1沉默后鼻咽癌細(xì)胞CNE2體外增殖能力以及凋亡的變化;利用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測FoxC1沉默后鼻咽癌細(xì)胞CNE2體外遷移和侵襲能力的變化。(5)采用免疫組化技術(shù)檢測上述93例鼻咽癌組織標(biāo)本中EMT相關(guān)分子標(biāo)志物Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin和β-Catenin的表達(dá),采用Western blot法檢測FoxC1沉默后鼻咽癌細(xì)胞CNE2中EMT相關(guān)分子標(biāo)志物Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin和β-Catenin的變化。結(jié)果:(1)FoxC1在93例鼻咽癌組織中有40(43.0%)例高表達(dá),明顯高于FoxC1在33例慢性鼻咽炎性組織中4(12.1%)例高表達(dá)(P0.01)。FoxC1的表達(dá)與鼻咽癌患者腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及臨床分期存在相關(guān)性。(2)foxc1在永生化鼻咽上皮細(xì)胞np69中表達(dá)最低,高轉(zhuǎn)移潛能鼻咽癌細(xì)胞5-8f高于低轉(zhuǎn)移潛能鼻咽癌細(xì)胞6-10b,低分化鼻咽癌細(xì)胞cne2高于高分化鼻咽癌細(xì)胞cne1。對五組細(xì)胞foxc1表達(dá)情況進(jìn)行兩兩比較,發(fā)現(xiàn)5-8f、6-10b、cne2、cne1細(xì)胞的foxc1表達(dá)水平與np69細(xì)胞相比均顯著升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p5-8f,np690.01,p6-10b,np690.01,pcne2,np690.01,pcne1,np690.01)。鼻咽癌細(xì)胞株中,在5-8f細(xì)胞中的表達(dá)高于在6-10b細(xì)胞中的表達(dá)(p0.01),在cne2細(xì)胞中的表達(dá)高于在cne1細(xì)胞中的表達(dá)(p0.01)。(3)經(jīng)westernblot檢測,sifoxc1-1657組能顯著降低鼻咽癌細(xì)胞cne2中foxc1的表達(dá)。(4)經(jīng)sirna處理后foxc1沉默的實(shí)驗(yàn)組cne2細(xì)胞與對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)對照組cne2細(xì)胞相比,細(xì)胞增殖抑制率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。鏡下觀察foxc1沉默的實(shí)驗(yàn)組cne2細(xì)胞的細(xì)胞核較陰性及空白對照組未見明顯增多的凋亡改變。foxc1沉默的實(shí)驗(yàn)組cne2細(xì)胞在體外遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)中到達(dá)下室的細(xì)胞數(shù)量均明顯少于空白對照組(pmigration0.01,pinvasion0.01)。(5)在40例高表達(dá)foxc1的鼻咽癌組織中,vimentin、fibronectin、n-cadherin的高表達(dá)率分別為29/40(72.5%)、25/40(62.5%)、39/40(97.5%),高于在53例foxc1低表達(dá)的鼻咽癌組織中vimentin、fibronectin、n-cadherin的高表達(dá)率22/53(41.5%)、20/53(37.7%)、42/53(79.3%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(pvimentin0.01,pfibronectin0.05,pn-cadherin0.05);e-cadherin和β-catenin在高表達(dá)foxc1的鼻咽癌組織中高表達(dá)率分別為26/40(65.0%)、24/40(60.0%),在foxc1低表達(dá)的鼻咽癌組織中的高表達(dá)率為34/53(64.2%)、39/53(73.6%),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(pe-cadherin0.05,pβ-catenin0.05)。在經(jīng)sirna沉默foxc1的實(shí)驗(yàn)組cne2細(xì)胞中,vimentin、fibronectin、n-cadherin的表達(dá)較空白對照組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(pvimentin0.01,pfibronectin0.01,pn-cadherin0.01);E-cadherin和β-Catenin的表達(dá)較對照組變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PE-cadherin0.05,Pβ-Catenin0.05)。結(jié)論:FoxC1在鼻咽癌組織和細(xì)胞中高表達(dá)以及與鼻咽癌患者腫瘤的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),其可能在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。本研究所設(shè)計(jì)的針對人FoxC1的siRNA能夠有效的下調(diào)鼻咽癌細(xì)胞CNE2中FoxC1的表達(dá),為進(jìn)一步研究FoxC1在鼻咽癌細(xì)胞中的作用提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。通過siRNA沉默F(xiàn)oxC1能降低鼻咽癌細(xì)胞CNE2的體外侵襲和遷移能力,其可能參與了鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。在組織中FoxC1的高表達(dá)與Vimentin、Fibronectin、N-cadherin的高表達(dá)相關(guān),在FoxC1沉默的CNE2細(xì)胞中Vimentin、Fibronectin、N-cadherin的表達(dá)下調(diào),其可能通過調(diào)控間質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá),進(jìn)而參與鼻咽癌上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程,從而促進(jìn)鼻咽癌的侵襲和轉(zhuǎn)移,有潛力成為鼻咽癌治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：FoxC1 鼻咽癌 轉(zhuǎn)移 侵襲 上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英漢縮略詞對照表10-12
• 前言12-16
• 1 材料與方法16-29
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料16
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑16-18
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器18
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法18-29
• 2 結(jié)果29-37
• 2.1 Fox C1在鼻咽癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征相關(guān)性29-30
• 2.2 Fox C1在鼻咽癌細(xì)胞株中的表達(dá)30-31
• 2.3 Western blot檢測CNE2細(xì)胞中Fox C1的沉默效果31-32
• 2.4 F o x C 1 沉默后對C N E 2 細(xì)胞生物學(xué)行為的影響32-34
• 2.5 E M T相關(guān)分子標(biāo)記物檢測34-37
• 3 討論37-43
• 4 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 綜述48-59
• 綜述參考文獻(xiàn)55-59
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄59-60
• 致謝60

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本文編號：474806