本文關鍵詞：FoxC1在鼻咽癌組織和細胞中的表達及其與EMT相關分子標志物關系的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:檢測鼻咽癌組織和細胞中FoxC1的表達情況。初步探討沉默F(xiàn)oxC1基因對鼻咽癌細胞CNE2生物學行為的影響。初步分析FoxC1與EMT相關分子標志物相關性。方法:(1)采用組織芯片及免疫組化技術檢測93例鼻咽癌組織標本和33例慢性鼻咽炎性組織標本中FoxC1的表達。(2)采用Western blot法檢測FoxC1在鼻咽癌細胞株6-10B、5-8F、CNE1、CNE2和永生化鼻咽上皮細胞株NP69中的表達情況,篩選出FoxC1表達最高的細胞株。(3)通過FoxC1siRNA沉默鼻咽癌細胞CNE2中FoxC1的表達,采用Western blot法檢測FoxC1沉默效果。(4)采用MTT法、DAPI細胞核染色法檢測FoxC1沉默后鼻咽癌細胞CNE2體外增殖能力以及凋亡的變化;利用Transwell小室實驗檢測FoxC1沉默后鼻咽癌細胞CNE2體外遷移和侵襲能力的變化。(5)采用免疫組化技術檢測上述93例鼻咽癌組織標本中EMT相關分子標志物Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin和β-Catenin的表達,采用Western blot法檢測FoxC1沉默后鼻咽癌細胞CNE2中EMT相關分子標志物Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin和β-Catenin的變化。結果:(1)FoxC1在93例鼻咽癌組織中有40(43.0%)例高表達,明顯高于FoxC1在33例慢性鼻咽炎性組織中4(12.1%)例高表達(P0.01)。FoxC1的表達與鼻咽癌患者腫瘤的淋巴結轉移、遠處轉移及臨床分期存在相關性。(2)foxc1在永生化鼻咽上皮細胞np69中表達最低,高轉移潛能鼻咽癌細胞5-8f高于低轉移潛能鼻咽癌細胞6-10b,低分化鼻咽癌細胞cne2高于高分化鼻咽癌細胞cne1。對五組細胞foxc1表達情況進行兩兩比較,發(fā)現(xiàn)5-8f、6-10b、cne2、cne1細胞的foxc1表達水平與np69細胞相比均顯著升高,有統(tǒng)計學意義(p5-8f,np690.01,p6-10b,np690.01,pcne2,np690.01,pcne1,np690.01)。鼻咽癌細胞株中,在5-8f細胞中的表達高于在6-10b細胞中的表達(p0.01),在cne2細胞中的表達高于在cne1細胞中的表達(p0.01)。(3)經westernblot檢測,sifoxc1-1657組能顯著降低鼻咽癌細胞cne2中foxc1的表達。(4)經sirna處理后foxc1沉默的實驗組cne2細胞與對應時間點對照組cne2細胞相比,細胞增殖抑制率差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。鏡下觀察foxc1沉默的實驗組cne2細胞的細胞核較陰性及空白對照組未見明顯增多的凋亡改變。foxc1沉默的實驗組cne2細胞在體外遷移和侵襲實驗中到達下室的細胞數(shù)量均明顯少于空白對照組(pmigration0.01,pinvasion0.01)。(5)在40例高表達foxc1的鼻咽癌組織中,vimentin、fibronectin、n-cadherin的高表達率分別為29/40(72.5%)、25/40(62.5%)、39/40(97.5%),高于在53例foxc1低表達的鼻咽癌組織中vimentin、fibronectin、n-cadherin的高表達率22/53(41.5%)、20/53(37.7%)、42/53(79.3%),差異有統(tǒng)計學意義(pvimentin0.01,pfibronectin0.05,pn-cadherin0.05);e-cadherin和β-catenin在高表達foxc1的鼻咽癌組織中高表達率分別為26/40(65.0%)、24/40(60.0%),在foxc1低表達的鼻咽癌組織中的高表達率為34/53(64.2%)、39/53(73.6%),差異無統(tǒng)計學意義(pe-cadherin0.05,pβ-catenin0.05)。在經sirna沉默foxc1的實驗組cne2細胞中,vimentin、fibronectin、n-cadherin的表達較空白對照組降低,差異有統(tǒng)計學意義(pvimentin0.01,pfibronectin0.01,pn-cadherin0.01);E-cadherin和β-Catenin的表達較對照組變化差異無統(tǒng)計學意義(PE-cadherin0.05,Pβ-Catenin0.05)。結論:FoxC1在鼻咽癌組織和細胞中高表達以及與鼻咽癌患者腫瘤的臨床分期及淋巴結轉移相關,其可能在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。本研究所設計的針對人FoxC1的siRNA能夠有效的下調鼻咽癌細胞CNE2中FoxC1的表達,為進一步研究FoxC1在鼻咽癌細胞中的作用提供了實驗基礎。通過siRNA沉默F(xiàn)oxC1能降低鼻咽癌細胞CNE2的體外侵襲和遷移能力,其可能參與了鼻咽癌的侵襲和轉移。在組織中FoxC1的高表達與Vimentin、Fibronectin、N-cadherin的高表達相關,在FoxC1沉默的CNE2細胞中Vimentin、Fibronectin、N-cadherin的表達下調,其可能通過調控間質標志物的表達,進而參與鼻咽癌上皮—間質轉化的過程,從而促進鼻咽癌的侵襲和轉移,有潛力成為鼻咽癌治療的一個新靶點。
【關鍵詞】：FoxC1 鼻咽癌 轉移 侵襲 上皮—間質轉化
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英漢縮略詞對照表10-12
• 前言12-16
• 1 材料與方法16-29
• 1.1 實驗材料16
• 1.2 主要實驗試劑16-18
• 1.3 主要實驗儀器18
• 1.4 實驗方法18-29
• 2 結果29-37
• 2.1 Fox C1在鼻咽癌組織中的表達及與臨床病理特征相關性29-30
• 2.2 Fox C1在鼻咽癌細胞株中的表達30-31
• 2.3 Western blot檢測CNE2細胞中Fox C1的沉默效果31-32
• 2.4 F o x C 1 沉默后對C N E 2 細胞生物學行為的影響32-34
• 2.5 E M T相關分子標記物檢測34-37
• 3 討論37-43
• 4 結論43-44
• 參考文獻44-48
• 綜述48-59
• 綜述參考文獻55-59
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄59-60
• 致謝60

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本文編號：474806