本文關(guān)鍵詞：微囊藻毒素-LR對人喉癌細(xì)胞Hep2蛋白磷酸酶2A的抑制作用及產(chǎn)生的細(xì)胞學(xué)影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：當(dāng)今水體富營養(yǎng)化污染以及由此造成的藍(lán)藻爆發(fā)已成為人類面臨的首要環(huán)境問題。大量藍(lán)藻在水體中生長時產(chǎn)生的許多有毒物質(zhì)微囊藻毒素對水環(huán)境產(chǎn)生了嚴(yán)重影響并其對多種生物包括人類都具有威脅。因此,微囊藻毒素的毒性作用機(jī)理已然成為研究熱點(diǎn)。微囊藻毒素LR是其中研究較為廣泛,毒性較大的微囊藻毒素。目前認(rèn)為,微囊藻毒素LR的主要致毒機(jī)理是通過抑制蛋白磷酸酶2A的活性從而產(chǎn)生一系列的細(xì)胞毒性作用。研究發(fā)現(xiàn)蛋白磷酸酶2A的活性對于腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、粘附、遷移等都具有重要的作用。實(shí)驗室的前期研究主要著眼于MCLR在多種正常細(xì)胞系中的致毒效應(yīng)并獲得了大量信息,也選擇了一種腫瘤細(xì)胞進(jìn)行了初步研究,為進(jìn)一步探究MCLR對腫瘤細(xì)胞的作用,本實(shí)驗選取了人喉癌上皮細(xì)胞Hep-2作為研究對象。研究方法：應(yīng)用流式細(xì)胞儀、免疫印跡技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、免疫共沉淀技術(shù)以及細(xì)胞增殖實(shí)驗、細(xì)胞劃痕實(shí)驗和Transwell腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗來研究不同濃度的MCLR (0.5μM、1μM、5μM和10μm)處理Hep-2細(xì)胞24小時后,產(chǎn)生各種細(xì)胞效應(yīng)以及對PP2A活性的影響方式和相關(guān)分子變化。研究結(jié)果：在本實(shí)驗的濃度和時間條件作用下,MCLR能夠進(jìn)入到Hep-2細(xì)胞內(nèi),與PP2A/C亞基共價結(jié)合抑制PP2A活性；MCLR能夠影響PP2A各亞基蛋白水平,如下調(diào)PP2A/A蛋白表達(dá),上調(diào)PP2A/C蛋白表達(dá),略微下調(diào)PP2A/B55α亞基蛋白表達(dá),但對PP2A/B56α亞基蛋白表達(dá)影響不明顯；MCLR還會影響PP2A/C的翻譯后修飾水平,上調(diào)PP2A/C亞基Tyr307位點(diǎn)磷酸化水平和Leu309位點(diǎn)的甲基化水平；MCLR能夠?qū)е翲ep-2細(xì)胞內(nèi)a4和PP2A/C亞基解離并影響AC核心酶穩(wěn)定性；MCLR還能造成細(xì)胞骨架的重構(gòu)以及骨架相關(guān)蛋白Tau、Ezrin和VASP磷酸化水平的上升；MCLR能夠引起P38和ERK1/2通路的激活；MCLR能夠促進(jìn)Hep-2細(xì)胞遷移,但是對其細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖影響不明顯。研究結(jié)論：MCLR能夠進(jìn)入Hep-2細(xì)胞并抑制PP2A活性,其作用方式是與PP2A/C亞基共價結(jié)合、改變PP2A各亞基蛋白水平及PP2A/C亞基翻譯后修飾水平、改變a4與PP2A/C亞基、AC核心酶的結(jié)合等。MCLR引起Hep-2細(xì)胞骨架重構(gòu)與PP2A影響骨架相關(guān)蛋白磷酸化有關(guān).MCLR促進(jìn)Hep-2細(xì)胞遷移,提示MCLR具有促進(jìn)腫瘤侵襲的作用。
【關(guān)鍵詞】：微囊藻毒素-LR 蛋白磷酸酶2A 細(xì)胞骨架 細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白 細(xì)胞遷移
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.65
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-12
• 1 前言12-16
• 2 實(shí)驗材料16-23
• 3 實(shí)驗方法23-28
• 4 實(shí)驗結(jié)果28-47
• 4.1 MCLR可進(jìn)入Hep-2細(xì)胞但不對細(xì)胞活力產(chǎn)生嚴(yán)重影響28-30
• 4.1.1 MCLR在本實(shí)驗條件下不對細(xì)胞活性產(chǎn)生嚴(yán)重影響28
• 4.1.2 MCLR可進(jìn)入Hep-2細(xì)胞28-30
• 4.2 MCLR對PP2A活性以及其各亞基蛋白水平和翻譯后修飾水平的影響30-33
• 4.2.1 MCLR抑制PP2A活性31
• 4.2.2 MCLR改變PP2A各亞基蛋白表達(dá)水平31-32
• 4.2.3 MCLR改變PP2A/C翻譯后修飾水平32-33
• 4.3 MCLR導(dǎo)致Hep-2細(xì)胞內(nèi)α4和PP2A/C亞基解離并影響AC核心酶穩(wěn)定性33-36
• 4.3.1 MCLR造成α4和PP2A/C,PP2A/A和PP2A/C的解離34-35
• 4.3.2 MCLR影響α4和PP2A/C在Hep-2中細(xì)胞定位35-36
• 4.4 MCLR對細(xì)胞骨架以及骨架相關(guān)蛋白的影響36-40
• 4.4.1 MCLR造成細(xì)胞骨架的重構(gòu)36-37
• 4.4.2 MCLR造成骨架相關(guān)蛋白磷酸化水平的改變37-38
• 4.4.3 MCLR對骨架相關(guān)蛋白Tau和Ezrin細(xì)胞定位影響不明顯38-40
• 4.5 MCLR對MAPK家族蛋白的影響40-42
• 4.5.1 MCLR激活P38和ERK1/2 MAPK通路40-41
• 4.5.2 MCLR對P38 MAPK和ERK1/2下游轉(zhuǎn)錄因子的影響41-42
• 4.6 MCLR刺激Hep-2細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞效應(yīng)42-47
• 4.6.1 MCLR對Hep-2細(xì)胞周期影響不明顯43
• 4.6.2 MCLR對Hep-2細(xì)胞凋亡影響不明顯43-44
• 4.6.3 MCLR對Hep-2細(xì)胞增殖影響不明顯44-45
• 4.6.4 MCLR對Hep-2細(xì)胞遷移具有促進(jìn)作用45-47
• 5 討論47-54
• 5.1 MCLR抑制PP2A活性及作用方式47-48
• 5.2 MCLR造成細(xì)胞骨架重構(gòu)與PP2A活性抑制有關(guān)48-51
• 5.3 MCLR對細(xì)胞遷移的影響與細(xì)胞骨架重構(gòu)有關(guān)51-52
• 5.4 MCLR在不同細(xì)胞系中的作用比較52-54
• 6 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 綜述 蛋白磷酸酶2A與腫瘤及腫瘤治療現(xiàn)狀60-67
• 參考文獻(xiàn)65-67
• 作者簡歷及在學(xué)期間參加的科研工作學(xué)習(xí)經(jīng)歷67-68

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