本文關(guān)鍵詞：異硫氰酸苯乙酯抑制胃癌侵襲轉(zhuǎn)移及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究異硫氰酸苯乙酯(PEITC)對人胃癌細(xì)胞株MGC-803侵襲遷移、化療敏感性及干細(xì)胞表型的影響,嘗試闡明其相關(guān)機(jī)制可能是通過影響轉(zhuǎn)化生長因子-β1受體(TGF-β1R),調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),改變胃癌干細(xì)胞(CSCs)表型發(fā)揮作用。方法：1.采用CCK-8法觀察PEITC體外對胃癌細(xì)胞株MGC-803增殖的抑制作用,選擇最佳給藥濃度。2.采用CCK-8法檢測PEITC對TGF-β1誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞MGC-803粘附能力影響,并與siRNA組做比較；采用Tranwell小室遷移及侵襲實(shí)驗(yàn),觀察PEITC對胃癌細(xì)胞株粘附、侵襲及遷移能力的影響。3.應(yīng)用Western blot技術(shù)、免疫熒光技術(shù)研究PEITC對侵襲轉(zhuǎn)移及EMT相關(guān)蛋白的影響。4.采用CCK-8法、Hoechst33258染色細(xì)胞流式技術(shù)觀察PEITC對胃癌細(xì)胞株MGC-803化療藥物敏感性影響。5.應(yīng)用Wsetern blot技術(shù)研究PEITC對凋亡相關(guān)蛋白的影響。6.采用流式細(xì)胞儀檢測PEITC對胃癌細(xì)胞MGC-803干細(xì)胞表型的影響。7.采用流式細(xì)胞儀分選后不同亞型胃癌細(xì)胞MGC-803體外細(xì)胞成球及體內(nèi)腫瘤皮下移植瘤成瘤能力觀察驗(yàn)證不同表型胃癌細(xì)胞干細(xì)胞特性。結(jié)果：1.20μMPEITC作用于人胃癌細(xì)胞株MGC-803 24h后,胃癌細(xì)胞死亡約50%。2.與空白組及TGF-β1誘導(dǎo)組相比,PEITC明顯降低了對照組及TGF-β1誘導(dǎo)組胃癌細(xì)胞的粘附、遷移及侵襲能力；3.對照組及TGF-β1誘導(dǎo)組的胃癌細(xì)胞接受PEITC給藥24h后,分別與空白組及TGF-β1組相比較,能顯著下調(diào)E-cad/N-cad轉(zhuǎn)化、下調(diào)TGF-β1,上調(diào)Vimentin、Twist、MMP9及MMP14表達(dá)。4.10μM的PEITC能提高人胃癌細(xì)胞MGC-803對DDP的敏感性。TGF-β1能降低該敏感性,使胃癌細(xì)胞對化療敏感性低于正常。5.Hoechst33258實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn),PEITC與DDP合用能提高DDP對腫瘤細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的破壞,促進(jìn)人胃癌細(xì)胞株凋亡,siRNA與PEITC作用類似。6.通過細(xì)胞流式分析細(xì)胞凋亡可知,小劑量的PEITC可將DDP的早凋率由14.2%提升至40.0%,siRNA可將其早凋率提升至46.2%。7.Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白caspase 3及c-caspase 3后發(fā)現(xiàn),PEITC可促進(jìn)caspase3的剪切及c-caspase 3的活化,提高人胃癌細(xì)胞MGC-803對DDP的敏感性,其作用于siRNA相似,與TGF-β1相反,結(jié)合第一部分實(shí)驗(yàn),考慮可能與PEITC能抑制TGF-β1誘導(dǎo)的EMT轉(zhuǎn)化有關(guān)。8.PEITC能下調(diào)胃癌常見干細(xì)胞標(biāo)記物CD133、CD44、CD71,上調(diào)NESTIN,與siRNA作用相仿,與TGF-β1誘導(dǎo)結(jié)果相反。CD24未見規(guī)律性變化,綜合考慮分選效率及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選取CD 133、CD44及NESTIN作為分選標(biāo)記物,進(jìn)行細(xì)胞分選。9.結(jié)合體外成球?qū)嶒?yàn)及體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn),我們可以證明,CD133+CD44+NESTIN-的細(xì)胞具有更強(qiáng)的干細(xì)胞特性。結(jié)論：PEITC能有效抑制人胃癌細(xì)胞株MGC-803增殖,并可降低其粘附、遷移及侵襲能力,其機(jī)制可能是通過調(diào)控TGF-β1受體來影響EMT轉(zhuǎn)化及MMPs活化來實(shí)現(xiàn)的；小劑量PEITC能提高人胃癌細(xì)胞株MGC-803對化療藥物DDP敏感性,其作用可能與其通過調(diào)控EMT影響CSCs表型相關(guān)；PEITC能一定程度影響人胃癌細(xì)胞株MGC-803干細(xì)胞標(biāo)記物,下調(diào)胃癌常見干細(xì)胞標(biāo)記物CD 133、CD44、CD71,上調(diào)NESTIN,下調(diào)胃癌細(xì)胞中干細(xì)胞亞型比例,這可能與其調(diào)節(jié)TGF-β1R對TGF-β1受體,從而調(diào)控EMT相關(guān)聯(lián)。
【關(guān)鍵詞】：異硫氰酸苯乙酯 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 腫瘤干細(xì)胞 化療增敏 轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-13
• 第一部分 理論研究13-20
• 1. 胃癌病因病機(jī)13-14
• 2. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對胃癌轉(zhuǎn)移的認(rèn)識14-19
• 2.1 腫瘤轉(zhuǎn)移與EMT相關(guān)性14-15
• 2.2 EMT分子機(jī)制研究進(jìn)展15-16
• 2.3 EMT、CSCs與腫瘤治療相關(guān)性研究進(jìn)展16-17
• 2.4 中醫(yī)藥干預(yù)腫瘤EMT、CSCs及化療敏感性研究進(jìn)展17-18
• 2.5 展望18-19
• 3. 白芥子有效成分異硫氰酸苯乙酯(PEITC)研究進(jìn)展19
• 4. 總結(jié)19-20
• 第二部分 異硫氰酸苯乙酯對胃癌侵襲轉(zhuǎn)移影響及機(jī)制研究20-37
• 一、研究方法20-30
• 1. 主要實(shí)驗(yàn)材料20-22
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法22-30
• 二、研究結(jié)果30-34
• 1. PEITC對胃癌細(xì)胞株MGC-803增殖能力影響30
• 2. 粘附實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證PEITC對人胃癌細(xì)胞株MGC-803粘附能力的影響30-31
• 3. 遷移實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證PEITC對人胃癌細(xì)胞株MGC-803遷移能力的影響31-32
• 4. 侵襲實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證PEITC對人胃癌細(xì)胞株MGC-803侵襲能力的影響32-33
• 5. PEITC對人胃癌細(xì)胞株MGC-803中TGF-β1含量的影響33-34
• 6. Western blot分析PEITC對人胃癌細(xì)胞株MGC-803侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響34
• 三、結(jié)論34-37
• 3.1 CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)34-35
• 3.2 粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析35
• 3.3 遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析35
• 3.4 侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析35
• 3.5 免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析35
• 3.6 Western Blot結(jié)果分析35
• 3.7 小結(jié)35-37
• 第三部分 異硫氰酸苯乙酯對胃癌化療敏感性的影響37-43
• 一、研究方法37-39
• 1. 主要實(shí)驗(yàn)材料37-38
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法38-39
• 二、研究結(jié)果39-41
• 1. CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)觀察PEITC對人胃癌細(xì)胞株化療敏感性影響39-40
• 2. Hoechst33258染色檢測細(xì)胞凋亡40-41
• 3. 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡41
• 4. Western blot檢測PEITC對凋亡相關(guān)蛋白影響41
• 三、結(jié)論41-43
• 3. ICCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)觀察PEITC對人胃癌細(xì)胞株化療敏感性影響41-42
• 3.2 Hoechst33258染色檢測細(xì)胞凋亡42
• 3.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡42
• 3.4 Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白42
• 3.5 小結(jié)42-43
• 第四部分 異硫氰酸苯乙酯對人胃癌細(xì)胞MGC-803干細(xì)胞表型的影響43-49
• 一、研究方法43-49
• 1. 主要實(shí)驗(yàn)材料43-44
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法44-46
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-48
• 4. 結(jié)論48-49
• 討論49-52
• 不足與展望52-53
• 參考文獻(xiàn)53-62
• 附表62-63
• 綜述63-66
• 參考文獻(xiàn)65-66
• 致謝66

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