本文關(guān)鍵詞：HER2特異性的嵌合抗原受體修飾的NK-92MI細(xì)胞對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞的殺傷研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：HER2陽(yáng)性的乳腺癌惡性程度高、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移發(fā)生早、預(yù)后差,對(duì)某些化療藥物有抵抗,并且HER2基因過度表達(dá)與患者較短的無病生存期和總生存期有密切關(guān)系。嵌合抗原受體(Chimeric antigen receptor,CAR)修飾的T細(xì)胞是目前國(guó)際上最受關(guān)注的腫瘤細(xì)胞治療技術(shù)之一,該技術(shù)通過在T細(xì)胞表面表達(dá)嵌合抗原受體,形成具有靶向性、克服腫瘤免疫逃逸能力、以及長(zhǎng)久維持T細(xì)胞活性的新一代細(xì)胞治療技術(shù),在針對(duì)血液腫瘤的治療中表現(xiàn)出了明顯的治療效果。然而,CAR-T細(xì)胞在治療實(shí)體腫瘤時(shí),由于潛在的脫靶毒性,使其安全性成為了其在實(shí)體瘤治療應(yīng)用上的重要瓶頸。國(guó)際上第一例CAR-T治療死亡的案例就是為HER2陽(yáng)性患者治療時(shí),引起正常肺組織表達(dá)的HER2受到CAR-T細(xì)胞攻擊導(dǎo)致。因此,本研究旨在通過將CAR構(gòu)建到NK-92MI細(xì)胞上,利用NK細(xì)胞不會(huì)產(chǎn)生白介素-6(IL-6)以及具有更短的體內(nèi)存活時(shí)間的特點(diǎn),來提高其安全性,為未來臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。我們通過PCR以及常規(guī)分子克隆技術(shù)獲得HER2-CAR片段,然后將其構(gòu)建到慢病毒載體上,進(jìn)行慢病毒包裝,將得到的慢病毒轉(zhuǎn)染NK-92MI細(xì)胞,藉此比較用HER2分子的嵌合抗原受體修飾的NK-92MI細(xì)胞(HER2-CAR-NK92MI)和未被基因修飾的NK-92MI細(xì)胞相比,能否提高對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌的殺傷效果。首先經(jīng)病毒轉(zhuǎn)染后,我們用流式檢測(cè)HER2-CAR在NK-92MI細(xì)胞表面的表達(dá)情況,并檢測(cè)HER2-CAR-NK92MI和未被基因修飾的NK-92MI細(xì)胞IFN-γ和顆粒酶的分泌差異,然后再用流式檢測(cè)二者對(duì)乳腺癌細(xì)胞的體外殺傷效果,最后小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證HER2-CAR-NK92MI細(xì)胞對(duì)乳腺癌原位腫瘤的殺傷作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),HER2-CAR-NK92MI細(xì)胞對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌腫瘤細(xì)胞MCF-7,T47D的殺傷效率分別為62.4%和50.0%,而未被HER2-CAR基因修飾的NK-92MI細(xì)胞對(duì)其殺傷效率只有22.1%和16.9%;同時(shí)HER2-CAR-NK92MI細(xì)胞對(duì)HER2陰性的腫瘤細(xì)胞MDA-MB-468的殺傷效率為13.6%,未被HER2-CAR基因修飾的NK-92MI細(xì)胞對(duì)其殺傷效率為12.7%,進(jìn)一步的SCID小鼠乳腺癌原位移植動(dòng)物模型試驗(yàn)也證實(shí)HER2-CAR-NK92MI細(xì)胞具有更好的殺傷效率。由此可以得出結(jié)論,經(jīng)HER2嵌合抗原體受體修飾的NK-92MI細(xì)胞可特異性識(shí)別HER2分子,對(duì)HER2陽(yáng)性的乳腺癌腫瘤細(xì)胞的殺傷效率顯著高于未被基因修飾的NK-92MI細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：NK-92MI細(xì)胞 HER2-CAR 乳腺癌細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 引言9-13
• 材料和方法13-20
• 1 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 1.1 細(xì)胞系13
• 1.2 主要試劑和材料13
• 1.3 主要儀器與設(shè)備13-14
• 1.4 主要抗體14
• 1.5 主要試劑配方14-15
• 2 實(shí)驗(yàn)方法15-20
• 2.1 HER2-CAR-pCDH的構(gòu)建15
• 2.2 慢病毒包裝15-17
• 2.3 流式細(xì)胞術(shù)分析（Flow cytometry，F(xiàn)C）目的蛋白的表達(dá)17
• 2.4 細(xì)胞因子的檢測(cè)17
• 2.5 體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)17-18
• 2.6 小鼠腫瘤模型18-20
• 結(jié)果20-27
• 1.1 HER2-CAR-pCDH重組質(zhì)粒構(gòu)建20
• 1.2 慢病毒包裝及滴度測(cè)定20-22
• 1.3 流式檢測(cè)病毒轉(zhuǎn)染22
• 1.4 HER2-/+細(xì)胞的篩選22-23
• 1.5 細(xì)胞毒性檢測(cè)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析23-25
• 1.6 IFN-g和顆粒酶的檢測(cè)25-26
• 1.7 小鼠腫瘤模型26-27
• 討論27-30
• 參考文獻(xiàn)30-35
• 綜述 NK細(xì)胞在抗腫瘤免疫研究中的進(jìn)展35-50
• NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用機(jī)制35-37
• 過繼NK細(xì)胞免疫療法37-38
• 不同細(xì)胞因子對(duì)NK細(xì)胞的影響38-39
• 嵌合抗原受體修飾NK細(xì)胞39-40
• NK細(xì)胞株的應(yīng)用40-42
• 抗原特異性嵌合抗原受體修飾的NK-92MI細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的作用機(jī)制42
• 與其他藥物結(jié)合治療42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 科研成果50-51
• 致謝51-53

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本文編號(hào)：433393