乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致女性死亡的主要原因。有研究表明,循環(huán)腫瘤細(xì)胞不僅可以克服甚至可以利用低切應(yīng)力的力學(xué)微環(huán)境進(jìn)行轉(zhuǎn)移。Caveolin-1(Cav-1)通常定位在細(xì)胞膜脂筏部位和caveolae區(qū)域,參與完成多種功能,其中包括內(nèi)吞、轉(zhuǎn)胞吞、膽固醇平衡、機(jī)械力傳導(dǎo)、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞增殖等。Cav-1的N-末端第14位殘基被絡(luò)氨酸激酶磷酸化后,參與粘著斑的動(dòng)態(tài)變化、細(xì)胞的定向遷移、ECM重組和內(nèi)吞等。Cav-1具有一個(gè)腳手架結(jié)構(gòu)域(Caveolin Scaffolding Domain,CSD),可以與多種蛋白相結(jié)合,如Ras/MEK/ERK、G蛋白、PI3K和JAK/STAT等,協(xié)助Cav-1與下游信號(hào)分子之間的相互作用。有研究表明,caveolae/Cav-1是細(xì)胞膜上的一種力學(xué)感受器,能對(duì)機(jī)械拉力和低切應(yīng)力做出快速反應(yīng),但其具體機(jī)制仍不清楚。因此,本研究采用平行板流動(dòng)腔系統(tǒng)(parallel-plate flow chamber system)模擬癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中的力學(xué)微環(huán)境,深入探究caveolae/Cav-1是如何介導(dǎo)低切應(yīng)力引起癌細(xì)胞遷移,及其力學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。在本研究中,...

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 乳腺癌的高轉(zhuǎn)移性
    1.2 CTCs在毛細(xì)血管中的低切應(yīng)力的力學(xué)微環(huán)境
    1.3 Caveolae和caveolin-1
        1.3.1 Caveolae和caveolin-1發(fā)現(xiàn)及功能
        1.3.2 Caveolin-1參與感受力學(xué)刺激,活化下游信號(hào)通路
    1.4 侵襲性偽足與腫瘤轉(zhuǎn)移
        1.4.1 侵襲偽足結(jié)構(gòu)和功能
        1.4.2 侵襲偽足形成所需的重要分子
            1.4.2.1 蛋白酶
            1.4.2.2 微絲骨架調(diào)節(jié)蛋白
            1.4.2.3 膜泡運(yùn)輸
    1.5 本課題的立題依據(jù)、研究?jī)?nèi)容和意義
        1.5.1 立題依據(jù)
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容和意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.1.2.2 Real-time PCR
            2.1.2.3 免疫印跡
            2.1.2.4 劃痕實(shí)驗(yàn)
            2.1.2.5 免疫熒光標(biāo)記
            2.1.2.6 侵襲性偽足形成和胞外基質(zhì)(FITC-gelatin)降解
            2.1.2.7 慢病毒載體構(gòu)建及穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選
            2.1.2.8 小鼠模型的建立
    2.2 軟件及統(tǒng)計(jì)分析
第三章 結(jié)果分析與討論
    3.1 低切應(yīng)力能夠上調(diào)Cav-1的表達(dá)和活化
    3.2 低切應(yīng)力能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞的遷移
    3.3 低的切應(yīng)力能夠促進(jìn)Cav-1在lipid rafts上的定位
    3.4 低的切應(yīng)力能夠促進(jìn)高轉(zhuǎn)移能力細(xì)胞Cav-1向lipid rafts的定位
    3.5 低切應(yīng)力能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞的侵襲
    3.6 脂筏的完整性對(duì)于Cav-1的活化和基質(zhì)降解具有重要作用
    3.7 低切應(yīng)力能夠影響MT1-MMP的表達(dá)
    3.8 低切應(yīng)力促進(jìn)PI3K/Akt信號(hào)通路活化
    3.9 慢病毒轉(zhuǎn)染沉默Cav-1,抑制PI3K/Akt下游信號(hào)通路活化,降低細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力
    3.10 沉默Cav-1對(duì)Cav-1和MT1-MMP在細(xì)胞膜上共定位的影響
    3.11 采用抑制劑抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路之后對(duì)MT1-MMP的表達(dá)影響
    3.12 慢病毒轉(zhuǎn)染沉默Cav-1及Cav-1 Y14D,對(duì)細(xì)胞骨架的影響
    3.13 慢病毒轉(zhuǎn)染沉默Cav-1及Cav-1 Y14D,對(duì)癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移的影響
    3.14 慢病毒轉(zhuǎn)染沉默Cav-1及Cav-1 Y14D,對(duì)轉(zhuǎn)移灶形成和Cav-1和MT1-MMP表達(dá)的影響
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 全文總結(jié)
    4.2 后續(xù)工作展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的成果
附錄



本文編號(hào)：4035018