乳腺癌的復發(fā)和轉(zhuǎn)移是導致女性死亡的主要原因。有研究表明,循環(huán)腫瘤細胞不僅可以克服甚至可以利用低切應力的力學微環(huán)境進行轉(zhuǎn)移。Caveolin-1(Cav-1)通常定位在細胞膜脂筏部位和caveolae區(qū)域,參與完成多種功能,其中包括內(nèi)吞、轉(zhuǎn)胞吞、膽固醇平衡、機械力傳導、細胞信號轉(zhuǎn)導和細胞增殖等。Cav-1的N-末端第14位殘基被絡(luò)氨酸激酶磷酸化后,參與粘著斑的動態(tài)變化、細胞的定向遷移、ECM重組和內(nèi)吞等。Cav-1具有一個腳手架結(jié)構(gòu)域(Caveolin Scaffolding Domain,CSD),可以與多種蛋白相結(jié)合,如Ras/MEK/ERK、G蛋白、PI3K和JAK/STAT等,協(xié)助Cav-1與下游信號分子之間的相互作用。有研究表明,caveolae/Cav-1是細胞膜上的一種力學感受器,能對機械拉力和低切應力做出快速反應,但其具體機制仍不清楚。因此,本研究采用平行板流動腔系統(tǒng)(parallel-plate flow chamber system)模擬癌細胞轉(zhuǎn)移過程中的力學微環(huán)境,深入探究caveolae/Cav-1是如何介導低切應力引起癌細胞遷移,及其力學信號轉(zhuǎn)導機制。在本研究中,...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 乳腺癌的高轉(zhuǎn)移性
    1.2 CTCs在毛細血管中的低切應力的力學微環(huán)境
    1.3 Caveolae和caveolin-1
        1.3.1 Caveolae和caveolin-1發(fā)現(xiàn)及功能
        1.3.2 Caveolin-1參與感受力學刺激,活化下游信號通路
    1.4 侵襲性偽足與腫瘤轉(zhuǎn)移
        1.4.1 侵襲偽足結(jié)構(gòu)和功能
        1.4.2 侵襲偽足形成所需的重要分子
            1.4.2.1 蛋白酶
            1.4.2.2 微絲骨架調(diào)節(jié)蛋白
            1.4.2.3 膜泡運輸
    1.5 本課題的立題依據(jù)、研究內(nèi)容和意義
        1.5.1 立題依據(jù)
        1.5.2 研究內(nèi)容和意義
第二章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗方法
            2.1.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.1.2.2 Real-time PCR
            2.1.2.3 免疫印跡
            2.1.2.4 劃痕實驗
            2.1.2.5 免疫熒光標記
            2.1.2.6 侵襲性偽足形成和胞外基質(zhì)(FITC-gelatin)降解
            2.1.2.7 慢病毒載體構(gòu)建及穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株篩選
            2.1.2.8 小鼠模型的建立
    2.2 軟件及統(tǒng)計分析
第三章 結(jié)果分析與討論
    3.1 低切應力能夠上調(diào)Cav-1的表達和活化
    3.2 低切應力能夠促進乳腺癌細胞MDA-MB-231細胞的遷移
    3.3 低的切應力能夠促進Cav-1在lipid rafts上的定位
    3.4 低的切應力能夠促進高轉(zhuǎn)移能力細胞Cav-1向lipid rafts的定位
    3.5 低切應力能夠促進乳腺癌細胞MDA-MB-231細胞的侵襲
    3.6 脂筏的完整性對于Cav-1的活化和基質(zhì)降解具有重要作用
    3.7 低切應力能夠影響MT1-MMP的表達
    3.8 低切應力促進PI3K/Akt信號通路活化
    3.9 慢病毒轉(zhuǎn)染沉默Cav-1,抑制PI3K/Akt下游信號通路活化,降低細胞的運動能力
    3.10 沉默Cav-1對Cav-1和MT1-MMP在細胞膜上共定位的影響
    3.11 采用抑制劑抑制PI3K/Akt/mTOR信號通路之后對MT1-MMP的表達影響
    3.12 慢病毒轉(zhuǎn)染沉默Cav-1及Cav-1 Y14D,對細胞骨架的影響
    3.13 慢病毒轉(zhuǎn)染沉默Cav-1及Cav-1 Y14D,對癌細胞肺轉(zhuǎn)移的影響
    3.14 慢病毒轉(zhuǎn)染沉默Cav-1及Cav-1 Y14D,對轉(zhuǎn)移灶形成和Cav-1和MT1-MMP表達的影響
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 全文總結(jié)
    4.2 后續(xù)工作展望
致謝
參考文獻
攻讀碩士學位期間取得的成果
附錄



本文編號：4035018