乳腺癌是一種嚴(yán)重危害女性健康的惡性腫瘤,其發(fā)病率逐年上升,并呈現(xiàn)出年輕化趨勢(shì)。乳腺癌患者死亡的首要原因是乳腺癌轉(zhuǎn)移和治療的失敗。因此明確乳腺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制,對(duì)于乳腺癌的防治具有非常重要的意義。腫瘤微環(huán)境對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移起到非常重要的作用。腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞相比,通過糖酵解途徑消耗更多的葡萄糖并產(chǎn)生少量的ATP和大量的乳酸,腫瘤的這種特征被稱為“瓦博格效應(yīng)”(Warburg effect)。乳酸堆積會(huì)造成腫瘤微環(huán)境的酸化。有報(bào)道顯示,乳酸作為腫瘤微環(huán)境里的一種化學(xué)信號(hào),乳酸的含量和遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移的發(fā)生率之間存在著正相關(guān)關(guān)系。絲氨酸/蘇氨酸激酶AKT,可通過對(duì)基因表達(dá)和酶活性的調(diào)節(jié),充分誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中的Warburg效應(yīng),促進(jìn)糖酵解和乳酸的生成。非肌細(xì)胞肌球蛋白II(Nonmuscle Myosin II,NM II)是細(xì)胞骨架的重要組成成分。作為分子馬達(dá)蛋白家族中的一員,它不僅為細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)提供動(dòng)力,還參與細(xì)胞的各種生理活動(dòng),如細(xì)胞遷移與粘附、胞質(zhì)分裂、囊泡分泌等。NM II是一個(gè)六聚體的結(jié)構(gòu),由重鏈(NMHC)和輕鏈(NMLC)組成的,其中NMLC對(duì)NMHC起著穩(wěn)定和調(diào)節(jié)作用,NMHC通過磷酸化活化...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 非肌細(xì)胞肌球蛋白概述
        1.1.1 非肌細(xì)胞肌球蛋白Ⅱ（Nonmuscle myosinⅡ, NMⅡ）
        1.1.2 非肌細(xì)胞肌球蛋白ⅡA（Nonmuscle myosinⅡA, NMⅡA）與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)
    1.2 腫瘤微環(huán)境
        1.2.1 腫瘤細(xì)胞代謝
        1.2.2 腫瘤的酸性環(huán)境
        1.2.3 腫瘤細(xì)胞代謝與腫瘤轉(zhuǎn)移
            1.2.3.1 腫瘤轉(zhuǎn)移
            1.2.3.2 腫瘤的酸性環(huán)境與腫瘤轉(zhuǎn)移
        1.2.4 AKT在腫瘤細(xì)胞代謝和轉(zhuǎn)移中的作用
    1.3 酸性環(huán)境、NMHC與腫瘤轉(zhuǎn)移
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 標(biāo)本
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要設(shè)備與儀器
        2.1.5 主要試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        2.2.2 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.2.3 細(xì)胞凍存
        2.2.4 免疫組織化學(xué)染色
        2.2.5 CCK-8 法繪制細(xì)胞生長曲線
        2.2.6 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 細(xì)胞周期檢測(cè)
        2.2.8 Western Blot
        2.2.9 細(xì)胞鋪展實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 Transwell小室體外侵襲實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 上清液乳酸含量檢測(cè)
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 乳腺組織中，pAKT、LDH和NMHCIIA的表達(dá)情況
        3.1.1 pAKT在乳腺組織中的表達(dá)
        3.1.2 LDH在乳腺組織中的表達(dá)
        3.1.3 乳腺組織中NMHCIIA的表達(dá)情況
    3.2 乳腺癌MCF-7 細(xì)胞中，通過抑制AKT來降低乳酸含量，從而觀察酸性環(huán)境對(duì)NMHCIIA的調(diào)節(jié)作用及MCF-7 細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
        3.2.1 加入MK2206后，pAKT的變化
        3.2.2 AKT被抑制后，培養(yǎng)液中乳酸變化
        3.2.3 AKT被抑制后，NMHCIIA表達(dá)的變化
        3.2.4 各組細(xì)胞MK2206處理后生物學(xué)行為的變化
            3.2.4.1 抑制AKT表達(dá)對(duì)細(xì)胞的增殖能力的影響
            3.2.4.2 抑制AKT表達(dá)對(duì)細(xì)胞周期的影響
            3.2.4.3 抑制AKT表達(dá)對(duì)細(xì)胞鋪展的影響
            3.2.4.4 抑制AKT表達(dá)對(duì)各組細(xì)胞遷移能力的影響
            3.2.4.5 抑制AKT表達(dá)后各組細(xì)胞侵襲力的變化
第4章 討論
    4.1 乳腺組織中AKT與乳酸的表達(dá)情況
    4.2 抑制AKT影響乳酸代謝對(duì)NMHC IIA的作用
    4.3 AKT通過乳酸活化NMHC II影響乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為
        4.3.1 AKT通過乳酸活化NMHC II影響乳腺癌細(xì)胞的增殖能力
        4.3.2 AKT通過乳酸活化NMHC II影響乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在讀期間取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：4019358