研究背景乳腺癌是全球年輕人發(fā)病率和死亡率最高的癌癥類型,尋找乳腺癌治療新靶點(diǎn),研發(fā)特異性藥物,是乳腺癌治療亟待解決的問題。血管生成擬態(tài)(Vasculogenic mimicry,VM)是侵襲性乳腺癌表型的標(biāo)志,是高侵襲性的腫瘤細(xì)胞自身圍成的一種高度模式化和功能性管狀結(jié)構(gòu),在腫瘤進(jìn)展的各個(gè)階段支持腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。VM形成過程中有許多因素是必需的,包括腫瘤缺氧微環(huán)境。缺氧微環(huán)境下,缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia-inducible factors,HIF-lα)被認(rèn)為是VM信號(hào)傳導(dǎo)中的“啟動(dòng)開關(guān)”,它可以直接或間接調(diào)節(jié)VE-Cadherin的表達(dá)并激活磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)級(jí)聯(lián)反應(yīng)。最后,通過基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPs)的表達(dá)和激活,收縮基質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞外微環(huán)境形成VM。但是,腫瘤細(xì)胞如何感知細(xì)胞外缺氧微環(huán)境的尚不清楚。HIF-lα雖然是對(duì)缺氧反應(yīng)的執(zhí)行者,但它本身并不直接感應(yīng)氧氣張力(p02)的變化,而是受脯氨酰4-羥化酶2(Prolyl-4-hydroxylases2,PHD2)的調(diào)節(jié)。PHD2的羥基化能調(diào)節(jié)HI...

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
前言
    1. 血管生成擬態(tài)
    2. 缺氧微環(huán)境
        2.1 缺氧微環(huán)境概述
        2.2 PP2A與缺氧微環(huán)境
        2.3 PHD2與缺氧微環(huán)境
            2.3.1 PHD2概述
            2.3.2 PHD2對(duì)HIF-1α的調(diào)控
            2.3.3 PHD2信號(hào)通路
            2.3.4 PHD2核質(zhì)分布
        2.4 VM與缺氧微環(huán)境
    3. 海藻糖衍生物研究現(xiàn)狀
    4. 本課題的研究內(nèi)容
實(shí)驗(yàn)材料和方法
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 化合物
        1.2 細(xì)胞株
        1.3 腺病毒
        1.4 試劑、耗材
        1.5 試劑配制
        1.6 儀器設(shè)備
        1.7 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 腺病毒轉(zhuǎn)染
        2.3 構(gòu)建缺氧模型
        2.4 MTT細(xì)胞生長抑制實(shí)驗(yàn)
        2.5 Western Blotting檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)
        2.6 細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)
        2.7 劃痕細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        2.8 Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        2.9 Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
        2.10 體外血管生成擬態(tài)的形成
        2.11 免疫熒光PHD2蛋白亞細(xì)胞定位
        2.12 體外PP2A酶活性的測(cè)定
        2.13 體內(nèi)乳腺癌肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)
        2.14 CD34/APS雙染實(shí)驗(yàn)
        2.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 第一部分:PP2A/PHD2/HIF-1α信號(hào)軸對(duì)乳腺癌細(xì)胞缺氧微環(huán)境下血管擬態(tài)的調(diào)控
        3.1.1 乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞體外缺氧模型的建立
        3.1.2 PP2A誘導(dǎo)劑FTY720和抑制劑OA對(duì)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞的生長抑制作用
        3.1.3 缺氧環(huán)境下PP2A對(duì)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞遷移的影響
        3.1.4 缺氧環(huán)境下PP2A對(duì)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞侵襲的影響
        3.1.5 缺氧環(huán)境下PP2A對(duì)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞粘附的影響
        3.1.6 缺氧環(huán)境下PP2A對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞VM形成的影響
        3.1.7 缺氧環(huán)境下PP2A對(duì)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞VM相關(guān)蛋白相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        3.1.8 缺氧環(huán)境下PP2A對(duì)裸鼠乳腺癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移的影響
        3.1.9 PP2A對(duì)裸鼠肺組織VM形成的影響:CD34/PAS雙染
        3.1.10 缺氧環(huán)境對(duì)PP2A酶活性的影響
        3.1.11 PP2A對(duì)HIF積累的影響
        3.1.12 PP2A對(duì)乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞缺氧條件下HIF-1α的影響與PHD2有關(guān)
        3.1.13 PP2A對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞PHD2亞細(xì)胞定位的影響
    3.2 第二部分:海藻糖衍生物DMBT靶向干預(yù)的機(jī)制研究
        3.2.1 DMBT和PP2A的分子對(duì)接研究
        3.2.2 缺氧環(huán)境下DMBT對(duì)PP2A酶活性的影響
        3.2.3 缺氧環(huán)境下DMBT對(duì)MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞VM的影響
        3.2.4 缺氧環(huán)境下DMBT對(duì)裸鼠乳腺癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移的影響
        3.2.5 CD34/PAS雙染檢測(cè)DMBT及PP2A對(duì)裸鼠肺組織VM形成的影響
        3.2.6 缺氧環(huán)境下DMBT及PP2A對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞PHD2亞細(xì)胞定位的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表



本文編號(hào)：4010106