研究目的缺氧是實(shí)體腫瘤微環(huán)境的重要特征之一,當(dāng)腫瘤體積生長至1mm3時(shí),其內(nèi)部一般都會(huì)有相當(dāng)數(shù)量的腫瘤細(xì)胞處于缺氧狀態(tài)。腫瘤可通過多種血管生成方式來緩解自身的缺氧狀態(tài)。血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry,VM)是由惡性腫瘤細(xì)胞形成的一種特殊的血液供應(yīng)模式,其管道的管壁完全由腫瘤細(xì)胞而非內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成,管腔內(nèi)含有紅細(xì)胞,周圍沒有壞死或炎癥浸潤。缺氧可以促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌VM的形成。本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明缺氧可以促進(jìn)Bcl-2蛋白和Twist1蛋白相互結(jié)合、作用,最終促進(jìn)VM的形成,但其具體機(jī)制尚不明確。本研究擬探討缺氧情況下Bcl-2蛋白與Twist1蛋白互作促進(jìn)VM的機(jī)制。研究方法1、比較不同肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞系的Bcl-2、Twist1表達(dá)情況,篩選出Hep G2細(xì)胞系和Bel7402細(xì)胞系。Hep G2細(xì)胞系高表達(dá)Bcl-2蛋白,低表達(dá)Twist1蛋白,Bel7402細(xì)胞系與之相反,低表達(dá)Bcl-2蛋白,高表達(dá)Twist1蛋白。2、應(yīng)用氯化鈷對體外培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞系進(jìn)行缺氧,應(yīng)用western blot、免疫熒光觀察缺氧后Bcl-2和Twist1蛋白表達(dá)的變化,并應(yīng)用膠上三維...

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、缺氧通過Bcl-2/Twist1互作促進(jìn)VM的形成的機(jī)制
    1.1 對象和方法
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.2 所需主要試劑及溶液的配制
        1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 四種肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞系具有不同的Bcl-2、Twist1表達(dá)水平
        1.2.2 缺氧對HepG2、Bel7402細(xì)胞系Bcl-2、Twist1表達(dá)的影響
        1.2.3 缺氧對HepG2、Bel7402細(xì)胞系VM形成的影響
        1.2.4 篩選并鑒定穩(wěn)定過表達(dá)Twist1的HepG2細(xì)胞以及穩(wěn)定過表達(dá)Bcl-2的Bel7402細(xì)胞
        1.2.5 常氧環(huán)境下Bcl-2/Twist1共過表達(dá)促進(jìn)Twist1入核
        1.2.6 常氧環(huán)境下Bcl-2/Twist1共過表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT
        1.2.7 常氧條件下Bcl-2/Twist1共過表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞干性
        1.2.8 常氧條件下Bcl-2/Twist1共過表達(dá)促進(jìn)VM生成
        1.2.9 篩選并鑒定穩(wěn)定降表達(dá)Bcl-2 的HepG2細(xì)胞以及穩(wěn)定降表達(dá)Twist1的Bel7402細(xì)胞
        1.2.10降表達(dá)Bcl-2 或Twist1減弱缺氧對于EMT和干性的促進(jìn)作用
        1.2.11降表達(dá)Bcl-2 或Twist1減弱缺氧對于VM形成的促進(jìn)作用。
    1.3 討論
        1.3.1 缺氧通過促進(jìn)Bcl-2/Twist1互作來促進(jìn)VM形成
        1.3.2 Bcl-2/Twist1互作促進(jìn)VM的機(jī)制與EMT、腫瘤細(xì)胞干性相關(guān)
    1.4 小結(jié)
二、裸鼠移植瘤模型中缺氧對Bcl-2/Twist1表達(dá)以及VM形成的影響
    2.1 對象和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)對象
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞
        2.1.3 主要儀器與試劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1.5 結(jié)果判定
        2.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 體內(nèi)缺氧腫瘤細(xì)胞經(jīng)過早期缺氧階段后生長加快
        2.2.2 體內(nèi)缺氧促進(jìn)Bcl-2/Twist1共過表達(dá)并促進(jìn)Twist1入核
        2.2.3 缺氧移植瘤組織中細(xì)胞表型向EMT方向轉(zhuǎn)變
        2.2.4 缺氧移植瘤組織中干性相關(guān)分子表達(dá)增多
        2.2.5 缺氧移植瘤組織中VM形成情況
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 缺氧在腫瘤中的作用及研究進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3977589