研究背景：胃癌隸屬消化道惡性腫瘤范疇,起源于胃黏膜上皮,其發(fā)病率在消化道惡性腫瘤中位居首位。NQO1蛋白又稱醌氧化還原酶,不僅是一種黃色素酶,也是一種Ⅱ相解毒酶,其發(fā)生缺陷后,與腫瘤發(fā)生的易感性密切相關(guān)。目前研究表明,NQO1蛋白在惡性腫瘤中呈高表達(dá),并與患者的不良預(yù)后緊密相連,但其在胃癌組織中的報(bào)道較少。p-拉帕醌(β-lapachone)是NQO1蛋白的一種有效抑制劑,提取于中南美洲的天然產(chǎn)物紫檀樹的樹皮,研究表明,p-拉帕醌可誘導(dǎo)前列腺癌、乳腺癌、白血病等多種腫瘤細(xì)胞的凋亡,也可作為一種治療結(jié)腸癌和前列腺癌的放射增敏劑,但其在胃癌中的作用和機(jī)制尚不清楚。因此,深入研究NQO1蛋白及其抑制劑p-拉帕醌在胃癌預(yù)后評(píng)估及靶向治療中的作用具有重要的臨床指導(dǎo)意義。研究目的：探討NQO1蛋白在胃癌組織中過表達(dá)的臨床病理學(xué)意義,并通過體外分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究NQO1抑制劑β-拉帕醌對(duì)SGC-7901和AGS胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,分析其殺傷胃癌細(xì)胞的作用及分子機(jī)制,為胃癌的臨床靶向治療及預(yù)后評(píng)估提供新的靶點(diǎn)。材料和方法：應(yīng)用免疫組化方法在53例癌旁正常組織、31例胃黏膜不典型增生組織和203例...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
1 研究背景
2 材料與方法
    2.1 臨床資料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)
        2.2.2 MTT
            2.2.2.1 原理
            2.2.2.2 MTT檢測(cè)
            2.2.2.3 MTT篩選藥物濃度
        2.2.3 平板克隆實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 qRT-PCR
            2.2.4.1 總RNA提取
            2.2.4.2 逆轉(zhuǎn)錄(RT)
            2.2.4.3 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)
            2.2.4.4 電泳
        2.2.5 Western Blot
            2.2.5.1 細(xì)胞裂解及蛋白提取
            2.2.5.2 SDS-PAGE電泳
            2.2.5.3 轉(zhuǎn)膜
            2.2.5.4 免疫雜交與ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)
        2.2.6 劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 細(xì)胞免疫熒光
        2.2.8 免疫組化檢測(cè)胃癌及病變組織中NQO1蛋白的表達(dá)
        2.2.9 流式細(xì)胞術(shù)Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.2.10 Hoechst 33342實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
3 結(jié)果
    3.1 NQO1蛋白在胃癌組織中明顯高表達(dá)
    3.2 NQO1蛋白過表達(dá)與胃癌的臨床生物學(xué)行為特點(diǎn)之間的關(guān)系
    3.3 NQO1蛋白過表達(dá)與胃癌患者生存期的相關(guān)性
    3.4 Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析胃癌患者生存期的影響因素
    3.5 NQO1蛋白過表達(dá)在早期和晚期胃癌患者生存期分析中的相關(guān)性
    3.6 β-lapachone抑制胃癌細(xì)胞增殖的作用及機(jī)制
    3.7 β-lapachone抑制SGC-7901和AGS胃癌細(xì)胞中NQO1蛋白的表達(dá)
    3.8 β-lapachone通過caspase途徑誘導(dǎo)SGC7901和AGS胃癌細(xì)胞的凋亡
    3.9 β-lapachone通過抑制EMT降低胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力
        3.9.1 β-lapachone抑制SGC-7901和AGS細(xì)胞的遷移
        3.9.2 β-lapachone抑制SGC-7901和AGS胃癌細(xì)胞EMT的形成
    3.10 β-lapachone通過抑制PI3K/Akt/mTOR通路體外殺傷胃癌細(xì)胞
4 討論
    4.1 NQO1高表達(dá)與胃癌的預(yù)后密切相關(guān),可能成為胃癌不良預(yù)后的有效分子標(biāo)志物
    4.2 β-lapachone通過抑制Skp2和DEK的表達(dá)抑制SGC-7901和AGS胃癌細(xì)胞的增殖
    4.3 β-lapachone體外抑制胃癌細(xì)胞的侵襲與遷移能力
    4.4 β-lapachone體外誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡
    4.5 PI3K/Akt/mTOR通路參與了 β-拉帕醌體外殺傷胃癌細(xì)胞的分子機(jī)制
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間的科研業(yè)績(jī)
綜述
    1 前言
    2 胃癌的分子靶向治療
        2.1 細(xì)胞表面受體抑制劑
        2.2 細(xì)胞周期相關(guān)的靶點(diǎn)藥物
        2.3 表觀遺傳變化的抑制劑
        2.4 下游信號(hào)抑制劑
        2.5 遷移機(jī)制的相關(guān)分子靶點(diǎn)
    3 結(jié)語與展望
參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3975683