發(fā)布時間：2024-04-17 19:49

　　目的:研究Wnt/β-catenin信號通路在幽門螺桿菌Tipα誘導(dǎo)胃癌SGC7901細胞形成EMT中的作用,為進一步闡明Tipα的致癌機制提供新線索。方法:大規(guī)模誘導(dǎo)表達Tipα,采用Ni-NTA層析法純化,SDS-PAGE凝膠電泳和Western-blot鑒定。以不同濃度Tipα分別刺激SGC7901不同時間,q RT-PCR和Western-blot檢測上皮標(biāo)志物(E-cadherin、ZO-1)和間質(zhì)標(biāo)志物(N-cadherin、Vimentin)的表達情況;用Tipα蛋白刺激SGC7901,顯微鏡下觀察細胞形態(tài);Western-blot檢測β-catenin Ser675和Ser552的磷酸化情況;免疫熒光觀察β-catenin的核聚集和核轉(zhuǎn)位。用Wnt/β-catenin通路抑制劑XAV939預(yù)處理SGC7901,再以Tipα刺激細胞,Western-blot、q RT-PCR檢測上皮標(biāo)志物(E-cadherin、ZO-1)和間質(zhì)標(biāo)志物(N-cadherin、Vimentin)的表達情況和通路下游靶基因(c-myc和cyclin D1)的表達情況;Western-blot檢...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
常用英文縮寫
第1章 緒論
第2章 實驗材料
    2.1 實驗儀器設(shè)備
    2.2 細胞株
    2.3 主要實驗試劑
第3章 實驗方法
    3.1 Tipα重組蛋白的大規(guī)模誘導(dǎo)表達
    3.2 Tipα重組蛋白的純化
    3.3 Tipα重組蛋白去內(nèi)毒素
    3.4 蛋白濃度的測定
    3.5 SGC7901細胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及保存
    3.6 Tipα刺激SGC7901
    3.7 實時定量PCR檢測E-cadherin、ZO-1、N-cadherin、Vimentin、C-myc和CyclinD1的mRNA表達
    3.8 免疫印跡法檢測E-cadherin、ZO-1、N-cadherin、Vimentin、β-catenin(Ser675和S552)、C-myc和CyclinD1的蛋白表達
    3.9 免疫熒光檢測β-catenin的核聚集和核轉(zhuǎn)位
    3.10 傷口愈合試驗
    3.11 Transwell檢測細胞遷移能力
    3.12 統(tǒng)計學(xué)分析
第4章 實驗結(jié)果
    4.1 Tipα重組蛋白的誘導(dǎo)表達與鑒定
    4.2 Tipα誘導(dǎo)胃癌SGC7901細胞發(fā)生EMT
    4.3 Tipα激活人胃癌細胞系SGC7901 Wnt/β-catenin信號通路
    4.4 Wnt/β-catenin通路抑制劑XAV939對SGC7901細胞EMT形成的影響
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
基金項目
攻讀學(xué)位期間的科研成果
致謝



本文編號：3956842