目的:研究Wnt/β-catenin信號(hào)通路在幽門螺桿菌Tipα誘導(dǎo)胃癌SGC7901細(xì)胞形成EMT中的作用,為進(jìn)一步闡明Tipα的致癌機(jī)制提供新線索。方法:大規(guī)模誘導(dǎo)表達(dá)Tipα,采用Ni-NTA層析法純化,SDS-PAGE凝膠電泳和Western-blot鑒定。以不同濃度Tipα分別刺激SGC7901不同時(shí)間,q RT-PCR和Western-blot檢測(cè)上皮標(biāo)志物(E-cadherin、ZO-1)和間質(zhì)標(biāo)志物(N-cadherin、Vimentin)的表達(dá)情況;用Tipα蛋白刺激SGC7901,顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài);Western-blot檢測(cè)β-catenin Ser675和Ser552的磷酸化情況;免疫熒光觀察β-catenin的核聚集和核轉(zhuǎn)位。用Wnt/β-catenin通路抑制劑XAV939預(yù)處理SGC7901,再以Tipα刺激細(xì)胞,Western-blot、q RT-PCR檢測(cè)上皮標(biāo)志物(E-cadherin、ZO-1)和間質(zhì)標(biāo)志物(N-cadherin、Vimentin)的表達(dá)情況和通路下游靶基因(c-myc和cyclin D1)的表達(dá)情況;Western-blot檢...

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
常用英文縮寫
第1章 緒論
第2章 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    2.2 細(xì)胞株
    2.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
第3章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 Tipα重組蛋白的大規(guī)模誘導(dǎo)表達(dá)
    3.2 Tipα重組蛋白的純化
    3.3 Tipα重組蛋白去內(nèi)毒素
    3.4 蛋白濃度的測(cè)定
    3.5 SGC7901細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及保存
    3.6 Tipα刺激SGC7901
    3.7 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)E-cadherin、ZO-1、N-cadherin、Vimentin、C-myc和CyclinD1的mRNA表達(dá)
    3.8 免疫印跡法檢測(cè)E-cadherin、ZO-1、N-cadherin、Vimentin、β-catenin(Ser675和S552)、C-myc和CyclinD1的蛋白表達(dá)
    3.9 免疫熒光檢測(cè)β-catenin的核聚集和核轉(zhuǎn)位
    3.10 傷口愈合試驗(yàn)
    3.11 Transwell檢測(cè)細(xì)胞遷移能力
    3.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 Tipα重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與鑒定
    4.2 Tipα誘導(dǎo)胃癌SGC7901細(xì)胞發(fā)生EMT
    4.3 Tipα激活人胃癌細(xì)胞系SGC7901 Wnt/β-catenin信號(hào)通路
    4.4 Wnt/β-catenin通路抑制劑XAV939對(duì)SGC7901細(xì)胞EMT形成的影響
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
基金項(xiàng)目
攻讀學(xué)位期間的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3956842