發(fā)布時間：2024-04-14 17:19

　　目的:構(gòu)建pHBLV-BCL2/Ig H-CAR質(zhì)粒,為制備表達嵌合抗原受體BCL2/Ig H-CD28-CD3ζ的慢病毒奠定基礎(chǔ),為FL等惡性淋巴瘤的免疫治療探索新方法。方法:(1)設(shè)計嵌合抗原受體Hinge-TM-CD28-CD3ζ片段,其中鉸鏈區(qū)(Hinge)和跨膜區(qū)(TM)來自Ig G4 Fc(Genbank:AAB59394.1),共刺激分子來自CD28(Genbank:AF222341.1),胞內(nèi)信號肽來自CD3ζ(Genbank:AK313946.1),將上述基因片段相應(yīng)功能區(qū)交由生物公司合成,且各個片段之間是直接連接的。(2)利用Eco RI和Bam HI雙酶切Hinge-TM-CD28-CD3ζ片段,將其克隆至慢病毒載體pHBLV-CMV-MCS-EF1-Zs Green的Eco RI和Bam HI酶切位點,獲得質(zhì)粒pHBLV-CD28-CD3ζ,進行瓊脂糖凝膠電泳、雙酶切鑒定。(3)選用BCL2/Ig H作為靶向抗原,TRIZOL法從DOHH2細胞中提取總m RNA,RT-PCR擴增、測序獲得BCL2/Ig H融合基因序列,與Genbank中的BCL2基因和Ig H...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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