背景:Annexin A5(ANXA5)是Ca²⁺依賴性磷脂結(jié)合蛋白,為膜聯(lián)蛋白家族成員,由319個氨基酸組成(35 kDa)。ANXA5在維持細(xì)胞膜穩(wěn)定性,胞吞胞吐,調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖,分化,凋亡以及炎癥和血栓形成過程中發(fā)揮重要作用。研究表明,ANXA5異常表達(dá)與腫瘤臨床進(jìn)展、耐藥和轉(zhuǎn)移等相關(guān)。肝癌和腎癌是兩種常見的惡性腫瘤,具有發(fā)生率高,轉(zhuǎn)移率高,預(yù)后不良等特點。腫瘤轉(zhuǎn)移是影響癌癥患者預(yù)后和生存的最主要原因,探索腫瘤發(fā)生進(jìn)展的分子機(jī)制,尋找腫瘤預(yù)防、診斷和治療的新靶點具有重要意義。本組前期發(fā)現(xiàn),ANXA5與鼠肝癌相關(guān),其水平變化潛在與鼠肝癌細(xì)胞體內(nèi)外惡性表型和體內(nèi)成瘤惡性程度及淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān),而其在腎癌中研究鮮有報道。本論文就ANXA5對肝癌和腎癌進(jìn)展,臨床相關(guān)性及作用機(jī)制進(jìn)行了研究。目的:1.ANXA5在HCC和ccRCC患者臨床樣本中的表達(dá)水平檢測及與臨床相關(guān)性;2.ANXA5表達(dá)水平對肝癌細(xì)胞Hca-P和ccRCC細(xì)胞786-O和ACHN體外惡性表型及體內(nèi)成瘤和轉(zhuǎn)移能力的影響;3.明確ANXA5與MYH9直接作用關(guān)系;4.闡述ANXA5通過ERK/RAC1調(diào)控肝...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 ANXA5高表達(dá)通過激活MEK/ERK、DOCK180/CRK1/II/RAC1促進(jìn)肝癌臨床進(jìn)展
    材料和方法
        一.材料
            1.動物,細(xì)胞系和肝癌臨床樣本
            2.主要儀器及試劑
        二.方法
            1.細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)
            2.免疫組化法檢測肝癌組織芯片中ANXA5,CRKI/II,RAC1的表達(dá)
            3.建立ANXA5表達(dá)穩(wěn)定下調(diào)Hca-P細(xì)胞株
            4.功能實驗
            5.ANXA5低表達(dá)對Hca-P體內(nèi)成瘤和淋巴道轉(zhuǎn)移潛能的影響
            6.ANXA5低表達(dá)對Hca-P細(xì)胞CRK/DOCK180/RAC1和pMEK-ERK分子蛋白表達(dá)的影響
            7.qRT-PCR法檢測ANXA5下調(diào)對VEMENTIN和MMP9的影響
            8.統(tǒng)計學(xué)分析
    結(jié)果
        1.ANXA5,CRKI/II,RAC1高表達(dá)促進(jìn)肝癌臨床進(jìn)展,三者表達(dá)水平正相關(guān)
        2.構(gòu)建ANXA5表達(dá)穩(wěn)定下調(diào)Hca-P單克隆細(xì)胞株
        3.ANXA5低表達(dá)降低Hca-P細(xì)胞體外增殖能力
        4.ANXA5低表達(dá)減弱Hca-P細(xì)胞體外轉(zhuǎn)移能力
        5.ANXA5低表達(dá)降低Hca-P細(xì)胞體內(nèi)成瘤和淋巴道轉(zhuǎn)移能力
        6.ANXA5低表達(dá)降低CRK/DOCK180/RAC1和pMEK-ERK分子蛋白水平
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 ANXA5與MYH9直接相互作用通過ERK/RAC1促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展
    材料和方法
        一.材料
            1.動物、細(xì)胞系、菌種和腎癌臨床樣本
            2.主要儀器及試劑
        二.方法
            1.細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)
            2.WB檢測ccRCC臨床樣本ANXA5、MYH9、RAC1表達(dá)
            3.構(gòu)建ANXA5穩(wěn)定低表達(dá)786-O和ACHN單克隆細(xì)胞株
            4.獲得ANXA5高表達(dá)786-O和ACHN細(xì)胞株
            5.功能實驗
            6.ANXA5和MYH9直接相互作用研究
            7.ANXA5和MYH9直接相互作用影響ccRCC細(xì)胞惡性表型的功能實驗
            9.ANXA5低表達(dá)對ACHN細(xì)胞體內(nèi)成瘤和淋巴道轉(zhuǎn)移潛能的影響
            10.統(tǒng)計學(xué)分析
    結(jié)果
        1.ANXA5和RAC1在ccRCC患者腫瘤組織中高表達(dá)正相關(guān)
        2.ANXA5對786-O和ACHN細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
        3.ANXA5與MYH9直接相互作用研究
        4.MYH9促進(jìn)ccRCC臨床進(jìn)展及作用機(jī)制研究
        5.MYH9低表達(dá)后與其直接結(jié)合的ANXA5減少
        6.ANXA5-MYH9直接作用影響腎癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移能力
        7.ANXA5可調(diào)控p-AKT、p-ERK1/2、RAC1等分子的蛋白表達(dá)
        8.ANXA5低表達(dá)降低ACHN細(xì)胞體內(nèi)腫瘤形成能力及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移潛能
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3920057