[目的]前期課題組通過基因芯片檢測篩選出EBV誘發(fā)淋巴瘤的3個(gè)候選關(guān)鍵分子,分別是TOP2A、PBK、HIST2H2BE基因。本課題采用熒光定量PCR和Western blot技術(shù)檢測體外EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞和正常人淋巴細(xì)胞中TOP2A、PBK、HIST2H2BE差異表達(dá)情況,驗(yàn)證前期課題組基因芯片結(jié)果,為EB病毒誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和淋巴瘤發(fā)生的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[方法]采集7例健康獻(xiàn)血員外周靜脈血并從中分離出正常人淋巴細(xì)胞,用EBV體外誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化,構(gòu)建轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞模型。提取EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞及配對的正常人淋巴細(xì)胞的總RNA及蛋白,應(yīng)用Western blot和熒光定量PCR方法,檢測TOP2A、PBK、HIST2H2BE基因在7例EBV體外轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞及配對的健康成人正常淋巴細(xì)胞中的表達(dá)。[結(jié)果]本實(shí)驗(yàn)成功建立了7例EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系,并檢測了TOP2A、PBK、HIST2H2BE基因在7例EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞及配對的正常人淋巴細(xì)胞中的表達(dá)情況。TOP2A基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá),轉(zhuǎn)化細(xì)胞TOP2A的mRNA與正常人淋巴細(xì)胞相比,表達(dá)...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖3.1倒置顯微鏡下的淋巴母細(xì)胞A：×20B：×40

第3章結(jié)果3.1EBV體外轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞抽取7例健康成年人的外周靜脈血，用淋巴細(xì)胞分離液分離出淋巴細(xì)胞，加入EB病毒液及含環(huán)孢素A的全培養(yǎng)基接種于24孔板內(nèi)。一周后鏡下可見淋巴細(xì)胞開始增大變亮，部分出現(xiàn)抱團(tuán)生長（即母細(xì)胞化），半貼壁狀態(tài)，待繼續(xù)生長，視....

圖3.2β-actin基因在各樣本中相對表達(dá)量柱狀圖、擴(kuò)增曲線、溶解曲線

細(xì)胞中3個(gè)基因mRNA的表達(dá)，數(shù)據(jù)結(jié)果表明：EB病毒體外轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中TOP2A、PBK、HIST2H2BE的mRNA表達(dá)均比正常人淋巴細(xì)胞升高（如表3.1所示）。表3.1EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞及其配對的正常人淋巴細(xì)胞中TOP2A、PBK、HIST2H2....

圖3.3TOP2A基因在各樣本中相對表達(dá)量柱狀圖、擴(kuò)增曲線及溶解曲線

ABC圖3.3TOP2A基因在各樣本中相對表達(dá)量柱狀圖、擴(kuò)增曲線及溶解曲線。A：TOP2A基因轉(zhuǎn)化組的相對表達(dá)量明顯高于正常組，差異明顯；B：TOP2A基因擴(kuò)增效率在90~110%之間，相關(guān)系數(shù)R2>0.99，TOP2A基因Ct值<35，認(rèn)為數(shù)據(jù)可靠；C....

圖3.4TOP2A表達(dá)差異的直方圖

ABC3.3TOP2A基因在各樣本中相對表達(dá)量柱狀圖、擴(kuò)增曲線及溶解曲線。OP2A基因轉(zhuǎn)化組的相對表達(dá)量明顯高于正常組，差異明顯；B：TOP2A基因擴(kuò)110%之間，相關(guān)系數(shù)R2>0.99，TOP2A基因Ct值<35，認(rèn)為數(shù)據(jù)可靠；C：TOP線在83℃左....

本文編號：3915235