目的:研究Endocan沉默對人髓系白血病細(xì)胞株增殖、細(xì)胞周期、凋亡和化療藥物敏感性的影響,并探討其作用機(jī)制。研究方法:通過RT-PCR和Western blot篩選出Endocan表達(dá)量相對較高的兩株人髓系白血病細(xì)胞株(U937、K562)。構(gòu)件Endocan-shRNA慢病毒載體,轉(zhuǎn)染至U937、K562白血病細(xì)胞株,通過RT-PCR和Western blot確定該慢病毒載體能抑制細(xì)胞Endocan表達(dá)。用CCK-8法、Western blot、流式細(xì)胞術(shù)檢測Endocan表達(dá)沉默對U937、K562細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、凋亡的影響。CCK-8法選擇出5-FU的IC₅₀值,來處理U937、K562細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測Endocan表達(dá)沉默對U937、K562細(xì)胞化療藥物敏感性的影響。同時(shí)Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白的變化。用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的K562白血病細(xì)胞建立白血病動(dòng)物模型,進(jìn)一步研究Endocan表達(dá)沉默在動(dòng)物體內(nèi)成瘤機(jī)制。觀察實(shí)驗(yàn)鼠腫瘤生長情況,HE染色和TUNEL法觀察細(xì)胞凋亡、壞死情況,免疫組化法分析PCNA、Cyclin D1的表達(dá),Weste...

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圖1.2Westernblot檢測四種白血病細(xì)胞株Endocan表達(dá)及相對表達(dá)量的灰度分析（n=3）

圖1.1四種白血病細(xì)胞株Endocan表達(dá)的熒光定量結(jié)果（n=3）

圖1.3三條干擾片段對白血病細(xì)胞株U937Endocan表達(dá)影響的熒光定量結(jié)果（n=3）

圖1.5shRNA-1、shRNA-2對白血病細(xì)胞株K562Endocan表達(dá)影響的熒光定量結(jié)果（n=3）

本文編號：3883956