目的本論文旨在探究核受體輔活化蛋白7(Nuclear receptor co-activator 7,NCOA7)在肺癌細(xì)胞中的抗氧化機(jī)制,為肺癌的治療及其耐藥性的研究提供一種新的思路。方法1.采用慢病毒表達(dá)系統(tǒng)NCOA7 shRNA在非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中敲低NCOA7,構(gòu)建A549-shNCOA7細(xì)胞株。同時(shí)在A549-shNCOA7細(xì)胞株中恢復(fù)表達(dá)NCOA7野生型(NCOA7-WT)或其突變體(N775,L522A/I523A,Del N105)。NCOA7的敲低和表達(dá)效果采用免疫印跡法檢測(cè)。2.采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)NCOA7敲低細(xì)胞株(A549-shNCOA7)和對(duì)照細(xì)胞株(A549-shLUC)在有無H₂O₂處理?xiàng)l件下的細(xì)胞增殖水平。3.采用劃痕和小室遷移分析法檢測(cè)A549-shNCOA7和A549-shLUC細(xì)胞株以及NCOA7-WT或其突變體恢復(fù)表達(dá)細(xì)胞株在有無H₂O₂處理?xiàng)l件下的細(xì)胞遷移能力。4.用光學(xué)顯微鏡觀察A549-shNCOA7和A549-shLUC細(xì)胞株以及NCOA7-W...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 非小細(xì)胞肺癌
    1.2 氧化應(yīng)激反應(yīng)
        1.2.1 概念
        1.2.2 氧化應(yīng)激反應(yīng)與腫瘤
    1.3 核受體輔活化蛋白7(NCOA7)
        1.3.1 NCOA7 簡(jiǎn)介
        1.3.2 NCOA7 在疾病及癌癥中的作用
    1.4 細(xì)胞的粘附與遷移
    1.5 研究意義
第二章 NCOA7 在肺癌細(xì)胞抵抗氧化應(yīng)激反應(yīng)中的作用
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.5 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.3 質(zhì)粒的擴(kuò)增與抽提
        2.2.4 穩(wěn)定敲低NCOA7 基因細(xì)胞株的建立
        2.2.5 免疫印跡法檢測(cè)NCOA7 蛋白表達(dá)水平
        2.2.6 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 細(xì)胞免疫熒光染色法
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 NCOA7 抵抗氧化應(yīng)激反應(yīng)促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖和遷移
        2.4.2 NCOA7 通過抗氧化作用促進(jìn)肺癌細(xì)胞的F-actin和黏著斑的形成
    2.5 討論
第三章 NCOA7的ERbd在肺癌細(xì)胞抵抗氧化應(yīng)激中的作用
    3.1 實(shí)驗(yàn)器材與實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.5 試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 GST pull-down實(shí)驗(yàn)
        3.2.2 免疫印跡法
        3.2.3 免疫熒光染色
        3.2.4 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
    3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 NCOA7的ERbd結(jié)構(gòu)域抵抗氧化應(yīng)激促進(jìn)肺癌細(xì)胞的粘附與伸展
        3.4.2 NCOA7的ERbd抵抗氧化應(yīng)激反應(yīng)促進(jìn)肺癌細(xì)胞的遷移
        3.4.3 NCOA7的ERbd通過抗氧化作用促進(jìn)肺癌細(xì)胞的F-actin和黏著斑形成
    3.5 討論
第四章 NCOA7 的抗氧化機(jī)制探究
    4.1 實(shí)驗(yàn)器材與實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.5 試劑配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 Co-IP實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 免疫熒光染色
    4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 NCOA7 與單氧化酶MICAL1 相互作用
        4.4.2 NCOA7被MICAL1 的氧化酶活性誘導(dǎo)入核
        4.4.3 NCOA7被MICAL1 的氧化酶活性誘導(dǎo)入核不依賴其核受體結(jié)合位點(diǎn)
    4.5 討論
結(jié)論與展望
    結(jié)論
    展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3875243