目的:本研究選取雄黃單藥,通過影響端粒蛋白POT1、TRF1、TRF2的表達(dá),探討其對端粒動力學(xué)的調(diào)節(jié)作用,為藥物靶向用于急性單核細(xì)胞白血病的治療尋求實(shí)驗(yàn)學(xué)支持,以期為研制治療急性單核細(xì)胞白血病的臨床新型藥物提供理論支持。方法:1.體外實(shí)驗(yàn):(1)培養(yǎng)THP-1細(xì)胞株。(2)CCK-8法檢測不同濃度、不同時間點(diǎn)雄黃作用于THP-1細(xì)胞影響其體外生長的作用,并明確其IC50值。(3)Annexin V/PI雙染法FCM檢測細(xì)胞凋亡情況;PI單染法FCM檢測細(xì)胞周期分布情況。(4)Western-blot檢測POT1、TRF1、TRF2蛋白表達(dá)水平。(5)實(shí)時定量PCR檢測用藥組POT1、TRF1、TRF2-m RNA表達(dá)。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):(1)以THP-1細(xì)胞株作用于NOD/SCID小鼠為實(shí)驗(yàn)平臺,給予雄黃灌胃干預(yù)。(2)觀察小鼠給藥后反應(yīng),瀕死小鼠組織行病理學(xué)方面檢查。(3)給藥3周后處死小鼠,取脾細(xì)胞懸液采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率及分析細(xì)胞周期改變;免疫組化檢測POT1、TRF1、TRF2蛋白表達(dá)的改變情況。結(jié)果:1.體外實(shí)驗(yàn):(1)CCK-8法示雄黃對THP-1細(xì)胞具有阻礙增殖作用...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
提要
abstract
引言
第一部分 雄黃影響急性單核細(xì)胞白血病THP-1 細(xì)胞端粒蛋白表達(dá)的體外研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 實(shí)驗(yàn)藥品
        2.3 CCK-8 法檢測細(xì)胞活性
        2.4 流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期分布
        2.5 Western-blot檢測端粒蛋白（POT1、TRF1、TRF2）的表達(dá)
        2.6 實(shí)時熒光定量PCR檢測POT1、TRF1、TRF2-mRNA表達(dá)改變
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 CCK-8 法檢測細(xì)胞活性
        3.2 細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞周期檢測
        3.3 Western-blot檢測蛋白的表達(dá)水平改變及相關(guān)性
        3.4 PCR檢測POT1、TRF1、TRF2- mRNA表達(dá)水平
第二部分 雄黃影響急性單核細(xì)胞白血病THP-1 細(xì)胞端粒蛋白表達(dá)的體內(nèi)研究
    實(shí)驗(yàn)一 THP-1/NOD-SCID小鼠動物模型的建立及鑒定
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及動物
            1.2 病理試劑、實(shí)驗(yàn)器械及耗材
            1.3 主要儀器和設(shè)備
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 動物分組及THP-1 細(xì)胞接種
            2.3 觀察NOD/SCID小鼠的一般狀況及存活時間
            2.4 外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血涂片檢測
            2.5 骨髓涂片
            2.6 病理組織學(xué)檢查
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 一般情況
            3.2 外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)及涂片鏡檢
            3.3 骨髓細(xì)胞學(xué)檢查
            3.4 組織病理學(xué)檢查
    實(shí)驗(yàn)二 雄黃對THP-1/NOD-SCID小鼠生存時間、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、蛋白表達(dá)的影響
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及動物
            1.2 實(shí)驗(yàn)藥物、試劑及器材
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 藥物干預(yù)
            2.2 一般情況及存活時間
            2.3 流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期分布
            2.4 免疫組化檢測
            2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 生存時間
            3.2 細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期的檢測
            3.3 免疫組化法檢測相關(guān)蛋白表達(dá)
第三部分 討論
    1 中醫(yī)學(xué)對AML的認(rèn)識
        1.1 病因
        1.2 病機(jī)
        1.3 治療原則
    2 端粒酶、端粒蛋白
        2.1 端粒酶
        2.2 端粒蛋白
    3 NOD/SCID鼠
    4 藥物分析
        4.1 雄黃的藥理作用
        4.2 雄黃的研究背景
    5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的討論
        5.1 雄黃體外試驗(yàn)
        5.2 雄黃對THP-1/NOD-SCID小鼠的體內(nèi)試驗(yàn)
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄及科研參與情況
發(fā)表論文



本文編號：3849243