發(fā)布時(shí)間：2023-09-28 23:37

　　目的:胰腺腺癌的高死亡率和診斷難度促使我們對該疾病有更深入的了解。探索G蛋白信號調(diào)節(jié)蛋白2(GPSM2)在胰腺癌中的預(yù)后價(jià)值及生理學(xué)作用機(jī)制。方法:從腫瘤基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中收集177例胰腺腺癌標(biāo)本的測序數(shù)據(jù)及臨床信息。然后分析GPSM2的表達(dá)與各臨床、預(yù)后參數(shù)之間的關(guān)系。利用大數(shù)據(jù)分析胰腺癌腫瘤微環(huán)境中各成分的比例,探索其與GPSM2的相關(guān)性。構(gòu)建穩(wěn)定的低表達(dá)GPSM2的PANC-1細(xì)胞,并通過MTT、細(xì)胞周期和transwell遷移實(shí)驗(yàn),探討相應(yīng)的生理學(xué)功能方面的變化。隨后通過微陣列分析檢測GPSM2沉默所造成的基因表達(dá)譜改變,將芯片數(shù)據(jù)應(yīng)用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行比對和可視化。并使用qRT-PCR和Western blot驗(yàn)證GPSM2的下游基因。結(jié)果:與正常組織相比,胰腺癌組織中GPSM2過表達(dá)(P<0.001),且其表達(dá)與慢性胰腺炎史(P=0.004)、腫瘤T分期(P=0.033)、腫瘤TNM分期(P=0.045)以及腫瘤分化程度(P<0.001)之間有顯著的相關(guān)。隨后進(jìn)行的單因素及多因素Cox...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮寫一覽表
緒論
第一章 生物信息學(xué)分析GPSM2 在胰腺癌中的作用
    1.1 實(shí)驗(yàn)方法
        1.1.1 TCGA以及GTEx數(shù)據(jù)的下載與整理
        1.1.2 數(shù)據(jù)校正和提取
        1.1.3 腫瘤微環(huán)境中基質(zhì)和免疫浸潤的評估
        1.1.4 統(tǒng)計(jì)方法
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 GPSM2 在胰腺癌及多種其他癌癥中的表達(dá)變化
        1.2.2 GPSM2 與胰腺癌中臨床病理參數(shù)的關(guān)系
        1.2.3 GPSM2 與胰腺癌預(yù)后的關(guān)系
        1.2.4 GPSM2 與胰腺癌腫瘤微環(huán)境的關(guān)系
    1.3 討論
第二章 GPSM2 下調(diào)表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的構(gòu)建
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)器材
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和傳代
        2.2.2 細(xì)胞收集
        2.2.3 慢病毒載體的構(gòu)建
        2.2.4 構(gòu)建穩(wěn)定低表達(dá)GPSM2 的細(xì)胞株
        2.2.5 總RNA的提取
        2.2.6 總RNA逆轉(zhuǎn)錄形成c DNA文庫
        2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測基因mRNA表達(dá)
        2.2.8 統(tǒng)計(jì)方法
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 各胰腺癌細(xì)胞株中GPSM2 的表達(dá)
        2.3.2 PANC-細(xì)胞中GPSM2 沉默效果評估
    2.4 討論
第三章 GPSM2對PANC-1 細(xì)胞生長、遷移的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)器材
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 MTT增殖實(shí)驗(yàn)
        3.2.2 流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
        3.2.3 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 統(tǒng)計(jì)方法
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 GPSM2 表達(dá)的沉默降低了胰腺癌細(xì)胞的增殖
        3.3.2 GPSM2 表達(dá)的沉默使細(xì)胞周期停滯在G2/M期
        3.3.3 GPSM2 表達(dá)的沉默降低了胰腺癌細(xì)胞的遷移能力
    3.4 討論
第四章 GPSM2 在胰腺癌中的調(diào)節(jié)機(jī)制探索
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)器材
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 基因表達(dá)譜芯片雜交、洗染、掃描
        4.2.2 芯片數(shù)據(jù)處理
        4.2.3 蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)與關(guān)鍵基因分析
        4.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測下游基因mRNA水平
        4.2.5 Western blot檢測下游基因蛋白質(zhì)水平
        4.2.6 統(tǒng)計(jì)方法
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 芯片數(shù)據(jù)分析和差異表達(dá)基因的鑒定
        4.3.2 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
        4.3.3 GPSM2 對整合素信號通路的影響
    4.4 討論
第五章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士攻讀期間發(fā)表的文章



本文編號：3848842