目的:觀察神經(jīng)菌毛蛋白1 (NRP1)基因?qū)Ψ派湫苑卫w維化(RIPF)進(jìn)程的影響,并探討其在Wnt/β-連環(huán)蛋白(β-catenin)信號(hào)通路和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)/Smads通路介導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)發(fā)生發(fā)展過程和細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)沉積中的作用。方法:利用Cre-LoxP重組酶系統(tǒng)構(gòu)建肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(AT-Ⅱ)特異性敲除NRP1基因的轉(zhuǎn)基因C57BL/6J小鼠并進(jìn)行鼠尾鑒定,將160只小鼠按照射后不同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為4周組、8周組、16周組和24周組,每組小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為野生型(Con)組、野生型單純照射(IR)組、NRP1基因特異性敲除(KO-Con)組和NRP1基因特異性敲除+照射(KO+IR)組,每亞組10只。KO-Con和KO+IR組小鼠腹腔注射他莫昔芬特異性敲除AT-Ⅱ細(xì)胞NRP1基因,IR組和KO+IR組小鼠采用20Gy全胸照射建立RIPF小鼠模型。模型構(gòu)建完成后,利用HE染色法和Masson染色法驗(yàn)證模型是否構(gòu)建成功;利用免疫組織化學(xué)(IHC)法檢測(cè)小鼠肺組織中Ⅰ型膠原(ColⅠ)和α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的蛋白表達(dá)水平;Western ...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器
    1.2 實(shí)驗(yàn)分組和RIPF模型建立
    1.3 小鼠肺組織HE染色和Masson染色
    1.4 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)小鼠肺組織中ColⅠ和α-SMA蛋白表達(dá)
    1.5 Western blotting法檢測(cè)小鼠肺組織中NRP1、TGF-β、Smad 2和β-catenin蛋白表達(dá)水平
    1.6 qRT-PCR法檢測(cè)小鼠肺組織中NRP1、ColⅠ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1、Smad2、上皮型鈣黏蛋白（E-cadherin）、神經(jīng)型鈣黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin)mRNA表達(dá)水平
    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 各組小鼠肺組織HE染色和Masson染色結(jié)果
    2.2 各組小鼠肺組織中NRP1蛋白和mRNA表達(dá)水平
    2.3 各組小鼠肺組織中ColⅠ和α-SMA蛋白和mRNA表達(dá)水平
    2.4 各組小鼠肺組織中β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白和mRNA表達(dá)水平
    2.5 各組小鼠肺組織中E-Cadherin、N-Cadherin和Vimentin mRNA表達(dá)水平
3 討論



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