目的:膀胱癌是最常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,同時是世界第九常見惡性腫瘤。對膀胱癌發(fā)生發(fā)展的機制進行深入的了解,將有助于改善膀胱癌的診斷與治療手段,使更多患者從中受益。CARMA3在許多類型腫瘤中均高表達,并能在其中促進細胞的增殖與轉(zhuǎn)移等多方面功能。一般認為CARMA3能夠響應(yīng)G蛋白偶聯(lián)受體與受體酪氨酸激酶激活NF-κB通路,進而促進一系列下游癌基因的表達。因此在膀胱癌中CARMA3可能促進腫瘤的生長并可能作為潛在的治療靶標。方法:在膀胱癌組織與細胞中利用實時定量PCR法檢測CARMA3的表達水平,并在膀胱癌細胞中驗證CARMA3對增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移等細胞功能的影響。利用RNA測序?qū)ふ褻ARMA3潛在的下游調(diào)控分子并利用實時定量PCR法與免疫印跡法進行驗證。利用NF-κB抑制劑和Ch-IP確認CARMA3對其中一個調(diào)控分子CPS1的具體作用機制。在膀胱癌組織與細胞中利用實時定量PCR法檢測CPS1的表達水平,并在膀胱癌細胞中驗證CPS1對增殖與凋亡等功能的影響,并在細胞增殖與凋亡功能上確定CPS1對CARMA3的回復(fù)作用。利用膀胱癌細胞的代謝組學(xué)展示CARMA3對于細胞代謝水平的影響。通過上下...

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :CARMA3蛋白在膀胱癌中的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 臨床資料及實驗材料
            2.1.1 臨床資料
        2.2 實驗試劑所需要主要儀器,藥品,試劑
            2.2.1 實驗細胞系
            2.2.2 實驗儀器
            2.2.3 實驗試劑
        2.3 實驗方法
            2.3.1 細胞培養(yǎng)
            2.3.2 細胞轉(zhuǎn)染
            2.3.3 實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)RT-q PCR
            2.3.4 免疫印跡法WesternBlot
            2.3.5 遷移與侵襲實驗Transwell
            2.3.6細胞增殖實驗CCK8
            2.3.7 細胞增殖實驗EdU
            2.3.8 流式檢測細胞凋亡
            2.3.9 裸鼠成瘤實驗
            2.3.10 質(zhì)粒抽提
            2.3.11 熱激轉(zhuǎn)化法擴增質(zhì)粒
            2.3.12 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 CARMA3在膀胱癌標本中高表達
        3.2 CARMA3 調(diào)節(jié)NF-κB通路的表達
        3.3 CARMA3影響膀胱癌細胞的增殖
        3.4 CARMA3影響膀胱癌細胞的凋亡
        3.5 CARMA3影響膀胱癌細胞的遷移與侵襲
        3.6 CARMA3影響小鼠體內(nèi)腫瘤的生長
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :CARMA3通過調(diào)控CPS1影響膀胱腫瘤細胞的生長
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 臨床資料及實驗材料
            2.1.1 臨床資料
        2.2 實驗試劑所需要主要儀器,藥品,試劑
            2.2.1 實驗細胞系
            2.2.2 實驗儀器
            2.2.3 實驗試劑
        2.3 實驗方法
            2.3.1 細胞培養(yǎng)
            2.3.2 細胞轉(zhuǎn)染
            2.3.3 實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)RT-q PCR
            2.3.4 免疫印跡法Western Blot
            2.3.5細胞增殖實驗CCK8
            2.3.6 細胞增殖實驗EdU
            2.3.7 流式檢測細胞凋亡
            2.3.8 RNA測序
            2.3.9 染色質(zhì)免疫共沉淀Ch-IP
            2.3.10 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 CARMA3敲減的轉(zhuǎn)錄組學(xué)結(jié)果
        3.2 確定CPS1為CARMA3 下游基因
        3.3 NF-κB通路對CPS1 的調(diào)控機制
        3.4 CPS1在腫瘤中的功能
        3.5 CPS1在膀胱癌細胞系中的功能
        3.6 CPS1 回復(fù)CARMA3 功能
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :CARMA3通過CPS1調(diào)控腫瘤核酸代謝
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗試劑所需要主要儀器,藥品,試劑
            2.1.1 實驗細胞系
            2.1.2 實驗儀器
            2.1.3 實驗試劑
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 細胞轉(zhuǎn)染
            2.2.3細胞增殖實驗CCK8
            2.2.4 流式檢測細胞凋亡
            2.2.5 代謝組學(xué)
            2.2.6 氨檢測試劑盒
            2.2.7 尿素檢測試劑盒
            2.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 代謝組學(xué)結(jié)果整體解讀
        3.2 CARMA3 影響CPS1 的代謝過程。
        3.3 CARMA3調(diào)節(jié)核酸類代謝物對膀胱癌細胞功能的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的科研成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3832244