第一部分PIK3CD-AS1對(duì)腎癌細(xì)胞侵襲的影響及相關(guān)機(jī)制研究目的:研究PIK3CD-AS1對(duì)腎癌細(xì)胞侵襲能力的影響,探索可能存在的機(jī)制,為腎透明細(xì)胞癌診斷和預(yù)后提供參考。方法:我們首先利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)構(gòu)建的穩(wěn)定高表達(dá)PIK3CD-AS1(簡(jiǎn)稱(chēng)PIK)的PIK細(xì)胞是否仍然高表達(dá)PIK;然后以PIK細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組,PEGFP細(xì)胞作為對(duì)照組,進(jìn)行細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn);根據(jù)生信分析結(jié)果,提取PIK細(xì)胞和PEGFP細(xì)胞的總蛋白,選擇p53為目的蛋白,利用Western blot檢測(cè)兩種細(xì)胞表達(dá)p53的情況。結(jié)果:實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示PIK細(xì)胞相對(duì)于PEGFP細(xì)胞仍高表達(dá)PIK;PIK細(xì)胞侵襲能力明顯弱于PEGFP細(xì)胞;Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示PIK細(xì)胞表達(dá)p53蛋白明顯高于PEGFP細(xì)胞。結(jié)論:PIK3CD-AS1抑制腎癌細(xì)胞的侵襲遷移,可能的機(jī)制是PIK3CD-AS1促進(jìn)腎癌細(xì)胞表達(dá)p53蛋白。第二部分DFFA在PIK3CD-AS1抑制腎癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展調(diào)控中發(fā)揮的作用研究目的:本課題組之前研究成果是PIK細(xì)胞較PEGFP細(xì)胞表達(dá)DFFA降低,深入研究DFFA在PIK細(xì)胞增殖、...

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
引言
    參考文獻(xiàn)
實(shí)驗(yàn)材料
實(shí)驗(yàn)儀器
第一章 PIK3CD-AS1對(duì)腎癌細(xì)胞侵襲的影響及相關(guān)機(jī)制研究
    細(xì)胞與方法
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 檢測(cè)上述PEGFP、PIK細(xì)胞中PIK3CD-AS1的表達(dá)量
        1.3 PIK3CD-AS1對(duì)腎癌細(xì)胞侵襲能力的影響
        1.4 Western blot檢測(cè)PIK3CD-AS1對(duì)腎癌細(xì)胞發(fā)揮作用相關(guān)機(jī)制
        1.5 統(tǒng)計(jì)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.PEGFP細(xì)胞和PIK細(xì)胞中PIK3CD-AS1的表達(dá)
        2.侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.PIK3CD-AS1靶基因預(yù)測(cè)和驗(yàn)證
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二章 DFFA在PIK3CD-AS1抑制腎癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展調(diào)控中發(fā)揮的作用研究
    細(xì)胞與方法
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 構(gòu)建過(guò)表達(dá)DFFA的769P^PIK+DFFA+細(xì)胞和對(duì)照組769P^PIK+DFFA-細(xì)胞
            1.2.1 大腸桿菌DH5α感受態(tài)的制備
            1.2.2 質(zhì)粒的擴(kuò)增及提取
            1.2.3 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染、篩選及鑒定
        1.3 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        1.4 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
        1.5 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        1.6 蛋白印記實(shí)驗(yàn)
        1.7 統(tǒng)計(jì)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.PIK(空)細(xì)胞和PIK(DFFA+)細(xì)胞中DFFA表達(dá)情況
        2.高表達(dá)DFFA可促進(jìn)PIK細(xì)胞增殖
        3.高表達(dá)DFFA可促進(jìn)PIK細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移
        4.高表達(dá)DFFA可促進(jìn)PIK細(xì)胞的凋亡率
        5.PIK細(xì)胞表達(dá)p53明顯高于PEGFP細(xì)胞且表達(dá)pAKT明顯低于PEGFP細(xì)胞,而高表達(dá)DFFA抑制PIK細(xì)胞表達(dá)p53蛋白且促進(jìn)其表達(dá)pAKT蛋白
    討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 PIK3CD-AS1調(diào)控DFFA表達(dá)的機(jī)制分析
    細(xì)胞與方法
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 檢測(cè)PEGFP細(xì)胞和PIK細(xì)胞中PIK3CD-AS1周?chē)虮磉_(dá)情況
            1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.2.2 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中各個(gè)PIK3CD-AS1周?chē)?M基因表達(dá)情況
        1.3 統(tǒng)計(jì)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.篩選結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第四章 SLC25A33在PIK3CD-AS1抑制腎癌細(xì)胞功能中的作用及機(jī)制研究
    細(xì)胞與方法
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 構(gòu)建敲低SLC25A33的769P^{PIK+siRNA-SLC25A33}細(xì)胞及對(duì)照組769P^{PIK+siRNA-ctrl}細(xì)胞
            1.2.1 siRNA轉(zhuǎn)染
            1.2.2 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的鑒定
        1.3 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        1.4 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
        1.5 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        1.6 蛋白印記實(shí)驗(yàn)
        1.7 實(shí)時(shí)定量PCR
        1.8 統(tǒng)計(jì)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.PIK(siRNA-空)細(xì)胞和PIK(siRNA-SLC)細(xì)胞中SLC25A33表達(dá)情況
        2.敲低SLC25A33可促進(jìn)PIK細(xì)胞增殖
        3.敲低SLC25A33可促進(jìn)PIK細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移
        4.敲低SLC25A33可抑制PIK細(xì)胞的凋亡率
        5.PIK細(xì)胞表達(dá)p53明顯高于PEGFP細(xì)胞且表達(dá)pAKT明顯低于PEGFP細(xì)胞,而降低表達(dá)SLC25A33可抑制PIK細(xì)胞表達(dá)P53蛋白且促進(jìn)其表達(dá)PAKT蛋白
        6.PIK細(xì)胞敲低SLC25A33后高表達(dá)DFFA
    討論
    參考文獻(xiàn)
第五章 p53及pAKT與PIK3CD-AS1抑制腎癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系
    細(xì)胞與方法
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 構(gòu)建下調(diào)表達(dá)p53的PEGFP、PIK、PIK(空)、PIK(DFFA+)細(xì)胞和下調(diào)表達(dá)pAKT的PEGFP、PIK、PIK(空)、PIK(DFFA+)細(xì)胞
            1.2.1 siRNA轉(zhuǎn)染
        1.3 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        1.4 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
        1.5 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        1.6 統(tǒng)計(jì)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
            1.1 p53可能是PIK細(xì)胞增殖活性明顯低于PEGFP細(xì)胞的關(guān)鍵因素
            1.2 pAKT可能是PIK細(xì)胞增殖活性明顯低于PEGFP細(xì)胞的關(guān)鍵因素
            1.3 p53可能是PIK(DFFA+)細(xì)胞增殖活性明顯高于PIK(空)細(xì)胞的關(guān)鍵因素
            1.4 pAKT可能是PIK(DFFA+)細(xì)胞增殖活性明顯高于PIK(空)細(xì)胞的關(guān)鍵因素
        2.侵襲實(shí)驗(yàn)
            2.1 p53可能是PIK細(xì)胞侵襲能力明顯低于PEGFP細(xì)胞的關(guān)鍵因素
            2.2 pAKT可能是PIK細(xì)胞侵襲能力明顯低于PEGFP細(xì)胞的關(guān)鍵因素
            2.3 p53可能是PIK(DFFA+)細(xì)胞侵襲能力明顯強(qiáng)于PIK(空)細(xì)胞的關(guān)鍵因素
            2.4 pAKT可能是PIK(DFFA+)細(xì)胞侵襲能力明顯強(qiáng)于PIK(空)細(xì)胞的關(guān)鍵因素
        3.凋亡實(shí)驗(yàn)
            3.1 p53可能是PIK細(xì)胞凋亡率明顯高于PEGFP細(xì)胞的關(guān)鍵因素
            3.2 pAKT可能是PIK細(xì)胞凋亡率明顯高于PEGFP細(xì)胞的關(guān)鍵因素
            3.3 p53可能是PIK(DFFA+)細(xì)胞凋亡率明顯低于PIK(空)細(xì)胞的關(guān)鍵因素
            3.4 pAKT可能是PIK(DFFA+)細(xì)胞凋亡率明顯低于PIK(空)細(xì)胞的關(guān)鍵因素
    討論
    參考文獻(xiàn)
第六章 結(jié)論與展望
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3826644