溶瘤病毒(Oncolytic viruses,Ovs)療法是腫瘤生物治療應(yīng)用的一個(gè)熱點(diǎn),其原理是利用病毒的復(fù)制能力,選擇性感染和裂解破壞腫瘤細(xì)胞,且正常細(xì)胞和組織無害,裂解的腫瘤細(xì)胞可以釋放子代病毒和腫瘤相關(guān)抗原,刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)進(jìn)一步殺傷腫瘤細(xì)胞。此外,有研究表明:某些OVs(如溶瘤痘病毒)還能夠特異性地感染并破壞腫瘤血管,間接引起未感染的腫瘤細(xì)胞凋亡或壞死。腫瘤新生血管(Tumor neo-vasculature)為腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移提供氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),OVs通過靶向感染和破壞腫瘤血管將進(jìn)一步增強(qiáng)其腫瘤殺傷能力并抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。溶瘤腺病毒,也被稱為條件復(fù)制型腺病毒(conditionally replicating adenovirus,CRAd)是目前臨床研究應(yīng)用最多的溶瘤病毒之一。目前在研的溶瘤腺病毒主要是基于人血清5型腺病毒(Ad5)改造而來。Ad5的主要細(xì)胞受體是柯薩奇-腺病毒受體(CAR),腺病毒通過其纖維蛋白(fiber)與受體結(jié)合,從而使其附著在細(xì)胞表面,并通過整合素受體內(nèi)化。由于腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞表面CAR低表達(dá)或不表達(dá),使得CRAd5缺乏感染腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 腫瘤血管簡(jiǎn)介
    1.2 溶瘤腺病毒簡(jiǎn)介
        1.2.1 溶瘤病毒定義
        1.2.2 腺病毒簡(jiǎn)介
        1.2.3 溶瘤腺病毒的基因工程修飾策略
    1.3 溶瘤腺病毒在抗血管生成基因治療中的應(yīng)用
    1.4 RGD肽在腫瘤抗血管生成治療中的應(yīng)用
    1.5 論文設(shè)計(jì)
        1.5.1 論文思路
        1.5.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞、質(zhì)粒、菌種、動(dòng)物
        2.1.2 主要材料和試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 受體表達(dá)分析
        2.2.2 真核表達(dá)載體和腺病毒骨架質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.3 Western-Blot
        2.2.4 腺病毒包裝、篩選、擴(kuò)增、純化及滴度檢測(cè)
        2.2.5 Dot-blot
        2.2.6 溶瘤腺病毒感染性質(zhì)檢測(cè)
        2.2.7 溶瘤腺病毒抑制腫瘤血管能力檢測(cè)
        2.2.8 溶瘤腺病毒體內(nèi)抗腫瘤活性檢測(cè)
        2.2.9 免疫熒光
        2.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    3.1 靶向腫瘤血管的腺病毒載體修飾策略可行性分析
        3.1.1 HUVEC細(xì)胞α2-3-SA表達(dá)分析
        3.1.2 不同修飾策略的真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.1.3 不同修飾策略的嵌合Fiber表達(dá)的驗(yàn)證
    3.2 靶向腫瘤血管的溶瘤腺病毒的獲得
        3.2.1 腺病毒骨架質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 靶向腫瘤血管的溶瘤腺病毒的包裝、篩選、純化及鑒定
    3.3 溶瘤腺病毒的感染性質(zhì)分析
        3.3.1 溶瘤腺病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)能力分析
        3.3.2 溶瘤腺病毒的溶瘤作用分析
        3.3.3 溶瘤腺病毒的感染依賴的受體分析
    3.4 .靶向腫瘤血管的溶瘤腺病毒抑制腫瘤血管能力分析
        3.4.1 溶瘤腺病毒的抑制HUVEC能力分析
        3.4.2 溶瘤腺病毒抑制VEGF作用分析
        3.4.3 VEGF對(duì) CRAd感染能力的影響
    3.5 靶向腫瘤血管的溶瘤腺病毒體內(nèi)靶向感染能力分析
        3.5.1 溶瘤腺病毒體內(nèi)靶向感染能力分析
        3.5.2 溶瘤腺病毒體內(nèi)抗腫瘤活性
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝



本文編號(hào)：3822747