發(fā)布時間：2023-04-29 19:21

　　在癌癥發(fā)生的早期,有少量循環(huán)腫瘤細胞(circulating tumor cells,CTCs)(≥5 CTCs/7.5 mL血液)游離于外周血中。不同腫瘤釋放的CTCs及同一腫瘤的CTCs在轉移的過程中會發(fā)生上皮-間充質(zhì)轉化(EMT),產(chǎn)生不同異質(zhì)性的亞型,主要表現(xiàn)為細胞表面的蛋白表達量和標志物類型的改變。有研究表明,外周血中CTCs的數(shù)量和類型與癌癥的發(fā)生與發(fā)展密切相關。因此,分離檢測癌癥患者外周血中不同亞型的CTCs對于癌癥的早期診斷、個性化治療以及療效評估具有重要意義。目前,檢測異質(zhì)性CTCs的方法主要有流式細胞分選法和微流控芯片法等。流式細胞分選法所需儀器昂貴且需專業(yè)技術人員操作,對樣本量要求也較高;而微流控芯片制備復雜也限制了它的應用。鑒于上述方法存在的問題,本工作在實驗室前期工作的基礎上,構建了一系列集不同磁響應性能和熒光性能于一體的仿生靶向探針,并基于該探針有效精確近同時分離富集多種異質(zhì)性的CTCs。論文的主要研究內(nèi)容如下:第一部分:構建不同磁響應強度的仿生熒光磁性探針。首先,結合包埋和層層自組裝法將具有不同磁響應強度的磁前體顆粒分別與熒光量子點組裝成系列熒光磁性納米復...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮寫符號對照表
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 CTCs的異質(zhì)性
    1.3 異質(zhì)性CTCs檢測的臨床意義
        1.3.1 早期腫瘤診斷
        1.3.2 指導個性化治療
        1.3.3 評價患者預后
    1.4 腫瘤細胞分離與分析技術研究進展
        1.4.1 單組分腫瘤細胞的捕獲技術
            1.4.1.1 基于抗原-抗體識別的細胞分選
            1.4.1.2 基于物理性質(zhì)的分離方法
        1.4.2 多組分腫瘤細胞亞群的捕獲技術
        1.4.3 腫瘤細胞分析技術
    1.5 仿生光磁納米材料在腫瘤細胞中的應用
        1.5.1 熒光-磁性納米復合物
        1.5.2 仿生納米粒子
    1.6 工作出發(fā)點及主要內(nèi)容
第二章 仿生熒光磁性探針的構建
    2.1 引言
    2.2 儀器與試劑
        2.2.1 實驗儀器
        2.2.2 實驗試劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 FMNPs的制備
            2.3.1.1 不同磁性梯度磁納米顆粒的合成及表征
            2.3.1.2 不同磁性梯度膠束的合成及表征
            2.3.1.3 包裹MPS的膠束的合成及表征
            2.3.1.4 S/M/W-FMNPs的合成及表征
        2.3.2 LFMNPs-PG的制備
            2.3.2.1 細胞膜的提取
            2.3.2.2 S/M/W-LFMNPs的制備
            2.3.2.3 S/M/W-LFMNPs的表征
            2.3.2.4 LFMNPs-PG的制備
    2.4 結果與討論
        2.4.1 FMNPs的表征
            2.4.1.1 磁前體納米顆粒的表征
            2.4.1.2 三種膠束的表征
            2.4.1.3 包裹MPS后三種膠束的表征
            2.4.1.4 FMNPs組裝過程中不同階段產(chǎn)物的表征
        2.4.2 LFMNPs-PG的表征
            2.4.2.1 細胞膜的提取
            2.4.2.2 LFMNPs的表征
            2.4.2.3 LFMNPs-PG的表征
    2.5 本章小結
第三章 仿生熒光磁性探針對多種腫瘤細胞的分離分析
    3.1 引言
    3.2 儀器與材料
        3.2.1 實驗儀器
        3.2.2 實驗試劑
    3.4 實驗方法
        3.4.1 細胞篩選
            3.4.1.1 細胞復蘇
            3.4.1.2 細胞培養(yǎng)
            3.4.1.3 流式細胞實驗
        3.4.2 S/M/W-LFMNPs-Ab的制備
            3.4.2.1 S/M/W-LFMNPs-Ab的制備
            3.4.2.2 仿生熒光磁性探針對靶細胞的特異性識別
            3.4.2.3 腫瘤細胞表面探針個數(shù)的考察
        3.4.3 以微球模擬構建磁性序列分離模型
            3.4.3.1 RhB-PEG-biotin、RhB-IgG、avidin、PL和PG對MPs非特異性吸附情況的考察
            3.4.3.2 模型的構建
            3.4.3.3 Protein G、Protein L和avidin投入量的優(yōu)化
            3.4.3.4 單組分體系中探針對靶標微球捕獲能力的表征
            3.4.3.5 三組分體系中探針對靶標微球捕獲能力的表征
            3.4.3.6 三組分體系中探針對靶標微球捕獲能力的表征
        3.4.4 S/M/W-LFMNPs-Ab對腫瘤細胞亞群的捕獲分離
            3.4.4.1 PBS中腫瘤細胞亞群的捕獲分離
                3.4.4.1.1 腫瘤細胞磁分離時間的優(yōu)化
                3.4.4.1.2 單組分細胞的捕獲分離
                3.4.4.1.3 兩組分細胞的捕獲分離
                3.4.4.1.4 三組分細胞的捕獲分離
            3.4.4.2 模擬血液樣本中腫瘤細胞的捕獲分離
            3.4.4.3 探針在PBS中對稀有數(shù)量CTCs的捕獲能力考察
    3.5 結果與討論
        3.5.1 細胞篩選
        3.5.2 S/M/W-LFMNPs-Ab對腫瘤細胞的識別能力
            3.5.2.1 S/M/W-LFMNPs-Ab對腫瘤細胞的特異性識別
            3.5.2.2 考察細胞表面結合探針個數(shù)
        3.5.3 以微球構建研究模型
            3.5.3.1 RhB-PEG-biotin、RhB-IgG、avidin、PL 和PG對MPs非特異性吸附情況的考察
            3.5.3.2 微球表面不同蛋白偶聯(lián)量的優(yōu)化
            3.5.3.3 優(yōu)化后的蛋白偶聯(lián)量比較
            3.5.3.4 S/M/W-LFMNPs-protein對MPs捕獲能力的表征
        3.5.4 S/M/W-LFMNPs-Ab捕獲腫瘤細胞的時間優(yōu)化
        3.5.5 多種腫瘤細胞亞群的捕獲分離
            3.5.5.1 PBS簡單體系中多種腫瘤細胞亞群的捕獲分離
            3.5.5.2 模擬血液樣本中多種腫瘤細胞亞群的捕獲分離
            3.5.5.3 稀有數(shù)量腫瘤細胞檢測限
    3.6 本章小結
第四章 總結與展望
    4.1 總結
        4.1.1 論文的創(chuàng)新點
        4.1.2 論文的不足之處
    4.2 展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間研究成果



本文編號：3805590