肝癌是癌癥相關(guān)死亡的第二大主要原因,而肝細胞癌是最常見的原發(fā)性肝癌類型。TGF-β在肝癌發(fā)展的早期和晚期階段發(fā)揮不同的作用,它能促進肝癌細胞遷移和侵襲等。TEAD4屬于TEAD轉(zhuǎn)錄因子家族,主要通過結(jié)合YAP/TAZ等轉(zhuǎn)錄輔助因子來發(fā)揮作用。有研究表明TEAD和YAP蛋白可以與Smad蛋白結(jié)合,然而TEAD4在TGF-β信號調(diào)控和Smad蛋白誘導的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的功能需要更深入研究。本論文研究發(fā)現(xiàn):過量表達TEAD4蛋白可以抑制TGF-β信號,并在基因組范圍內(nèi)抑制TGF-β靶基因的表達;TEAD4通過抑制Smad蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性而減弱TGF-β誘導的靶基因表達;功能上,TEAD4抑制TGF-β誘導的肝癌細胞遷移、侵襲和增殖;有趣的是,無論是野生型還是不與YAP結(jié)合的突變體TEAD4,都能抑制TGF-β信號、Smad蛋白的轉(zhuǎn)錄活性、靶基因表達,以及肝癌細胞遷移、侵襲和增殖。因此,本論文研究闡明了TEAD4蛋白能以不依賴YAP的方式抑制TGF-β/Smad信號的作用與分子機制,以及這種調(diào)控作用在肝癌細胞中的生物學功能。

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 肝癌的簡介
    1.2 TGF-β細胞因子
    1.3 TEAD家族轉(zhuǎn)錄因子
    1.4 TEAD和 TGF-β在肝癌中的作用
    1.5 TEAD蛋白和TGF-β信號的研究進展
第二章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要儀器設備
        2.1.2 主要試劑材料
        2.1.3 主要細胞及病毒
    2.2 方法
        2.2.1 主要試劑配制
        2.2.2 細胞復蘇
        2.2.3 細胞換液
        2.2.4 細胞傳代
        2.2.5 細胞凍存
        2.2.6 細胞計數(shù)
        2.2.7 RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄、實時定量PCR(Q-PCR)
        2.2.8 RNA-Seq
        2.2.9 免疫共沉淀
        2.2.10 Western blot
        2.2.11 熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>        2.2.12 細胞遷移
        2.2.13 基質(zhì)膠侵襲
        2.2.14 細胞增殖
        2.2.15 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.16 統(tǒng)計學分析
第三章 TEAD4 蛋白抑制TGF-β信號
    3.1 TEAD蛋白抑制TGF-β信號
    3.2 全基因組范圍檢測TGF-β靶基因表達
    3.3 TEAD4 蛋白抑制Smad蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性
    3.4 TEAD蛋白可以和Smad相互作用
    3.5 TEAD4 抑制TGF-β誘導的肝癌細胞增殖、遷移和侵襲
    3.6 討論
第四章 TEAD4以YAP非依賴的方式抑制TGF-β信號
    4.1 不結(jié)合YAP蛋白的TEAD4 點突變體質(zhì)粒的構(gòu)建和驗證
    4.2 TEAD4以YAP非依賴的方式抑制TGF-β信號和Smad轉(zhuǎn)錄活性
    4.3 TEAD4 點突變抑制TGF-β誘導的細胞增殖、遷移及侵襲
    4.4 討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 進一步工作方向
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：3791633