目的:探索TGF-β1/Smad7信號通路在哈薩克族食管鱗癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)中的作用及其具體機(jī)制。方法:運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測72例哈薩克族食管鱗癌組織及遠(yuǎn)端對應(yīng)癌旁組織中TGF-β1及Smad7蛋白的表達(dá)。進(jìn)一步在細(xì)胞水平,針對食管鱗癌細(xì)胞系Ec9706,基于RNA干擾技術(shù),使用LipofectamineTM2000試劑轉(zhuǎn)染TGF-β1 siRNA。采用qRT-PCR技術(shù)檢測TGF-β1及Smad7 m RNA表達(dá)水平;Western blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后各組TGF-β1、Smad7以及EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平;MTT、劃痕及流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的增殖、遷移、凋亡及周期的變化。結(jié)果:免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示,哈薩克族食管鱗癌組織中TGF-β1蛋白表達(dá)明顯高于遠(yuǎn)端對應(yīng)癌旁組織(P<0.05);Smad7蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)明顯低于遠(yuǎn)端對應(yīng)癌旁組織(P<0.05);TGF-β1與Smad7的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05,r=-0.253)。轉(zhuǎn)染TGF-β1 siRNA后,Ec9706細(xì)胞中TGF-β1 mRNA和蛋白表達(dá)量均降低,Smad7...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
前言
研究內(nèi)容與方法
    1 研究對象
        1.1 組織標(biāo)本及細(xì)胞系來源
        1.2 干擾序列
        1.3 引物設(shè)計(jì)與合成
        1.4 主要試劑
        1.5 試劑相關(guān)溶液配制
        1.6 主要儀器
    2 內(nèi)容與方法
        2.1 免疫組織化學(xué)方法
        2.2 Ec9706細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3 siRNA轉(zhuǎn)染步驟
        2.4 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)
        2.5 Western blot法315
        2.6 MTT法
        2.7 劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.8 細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期
        2.9 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制
    3 結(jié)果分析
    4 技術(shù)路線
結(jié)果
討論
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
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本文編號：3791367