背景:食管癌是人類常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,我國(guó)是食管癌的高發(fā)地區(qū),發(fā)病率和死亡率均居世界首位,且有著不斷上升的趨勢(shì)。食管癌的發(fā)生涉及到原癌基因的激活、抑癌基因的失活等改變,其中也伴隨著表觀遺傳學(xué)的變化,表觀遺傳學(xué)的異常改變可導(dǎo)致抑癌基因的失活,其中DNA甲基化是最常見(jiàn)的表觀遺傳學(xué)改變之一。G₀S₂基因是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的具有抑制癌癥發(fā)生、發(fā)展作用的基因,其在正常組織、細(xì)胞中普遍表達(dá),而在癌組織和癌細(xì)胞中表達(dá)水平顯著降低。G₀S₂基因在食管癌中的作用需作進(jìn)一步的驗(yàn)證和探索。目的:觀察G₀S₂基因在食管癌組織和食管癌旁組織中的表達(dá)差異并檢測(cè)其甲基化的情況以及探討其對(duì)食管癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響。方法:(1)收集2016年3月²017年4月在十堰市人民醫(yī)院手術(shù)切除的45例食管癌組織及相應(yīng)的食管癌旁組織(選取距癌組織邊緣>5 cm的食管組織),所有組織均通過(guò)倫理委員會(huì)審核。對(duì)收集到的組織樣本進(jìn)行RNA的提取,并測(cè)定所提取樣本RNA的濃度和純度。采用...

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)表
一、引言
二、實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)樣本
        2.1.2 主要藥品與試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
        2.2.1 組織總RNA的提取
        2.2.2 組織RNA逆轉(zhuǎn)錄主要步驟
        2.2.3 組織RNA的qRT-PCR擴(kuò)增和表達(dá)檢測(cè)
        2.2.4 食管癌組織DNA的提取
        2.2.5 DNA甲基化修飾試劑盒處理組織DNA
        2.2.6 亞硫酸氫鹽法處理組織基因組DNA
        2.2.7 DNA產(chǎn)物純化實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 甲基化特異性PCR
        2.2.9 TBE電泳緩沖液的配制
        2.2.10 核酸電泳實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 食管癌KYSE-70細(xì)胞的復(fù)蘇與凍存
        2.2.12 體外培養(yǎng)食管癌KYSE-70細(xì)胞以及細(xì)胞的處理
        2.2.13 食管癌KYSE-70細(xì)胞RNA的提取
        2.2.14 食管癌KYSE-70細(xì)胞RNA的逆轉(zhuǎn)錄和qRT-PCR擴(kuò)增
        2.2.15 CCK8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性
        2.2.16 Annexin V/FITC法細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.2.17 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 G₀S₂基因在食管癌組織和食管癌旁組織中的表達(dá)變化
    3.2 G₀S₂基因在食管癌組織和食管癌旁組織中甲基化檢測(cè)
    3.3 腺病毒轉(zhuǎn)染后的驗(yàn)證
    3.4 甲基化抑制劑處理后癌細(xì)胞G₀S₂mRNA表達(dá)量變化
    3.5 G₀S₂對(duì)食管癌KYSE-70細(xì)胞增殖的作用
    3.6 5-氮雜-2-脫氧胞苷對(duì)食管癌KYSE-70細(xì)胞增殖的作用
    3.7 G₀S₂對(duì)食管癌KYSE-70細(xì)胞凋亡的作用
    3.8 5-氮雜-2-脫氧胞苷對(duì)食管癌KYSE-70細(xì)胞凋亡的影響
四、討論
五、小結(jié)
參考文獻(xiàn)
六、文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
七、論文發(fā)表情況
八、致謝詞



本文編號(hào)：3791150