目的:富集于偽足的非典型激酶1(pesudopodium-enriched atypical kinase 1,PEAK1)是一種具有催化活性的非受體型酪氨酸激酶,其廣泛表達(dá)于多種組織與器官。本課題擬研究PEAK1在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的表達(dá)情況,探討其在NSCLC發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)作用,初步探索其可能參與的信號通路,從而為其是否能成為肺癌治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。方法:一、分析NSCLC組織中PEAK1表達(dá)水平和臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性獲取東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院心胸外科經(jīng)手術(shù)切除的102例肺癌組織標(biāo)本(68例石蠟包埋肺癌組織和34例石蠟包埋癌旁正常組織),免疫組織化學(xué)染色分析NSCLC組織和癌旁正常組織中PEAK1表達(dá)情況,統(tǒng)計分析PEAK1表達(dá)情況與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。二、探討PEAK1在NSCLC細(xì)胞中增殖、遷移和侵襲中的作用1.用qRT-PCR和Western blot測定五種肺癌細(xì)胞株中PEAK1表達(dá)水平,選擇95D及H1299細(xì)胞株進(jìn)行后期實驗。2.用慢病毒載體感染95D細(xì)胞和H1299細(xì)胞,構(gòu)建PEAK1過表達(dá)及敲除的95D和H1299細(xì)胞株,以及相應(yīng)的空載對照組細(xì)...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮寫詞表
前言
第一部分 PEAK1在NSCLC中的表達(dá)以及與臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性
    1. 材料
        1.1 主要儀器
        1.2 組織標(biāo)本
        1.3 主要試劑
    2. 方法
        2.1 免疫組化染色實驗步驟
        2.2 免疫組化結(jié)果判斷
        2.3 統(tǒng)計學(xué)方法
    3. 結(jié)果
        3.1 免疫組化檢測肺癌組織中PEAK1的表達(dá)水平
        3.2 NSCLC中PEAK1的表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系
    4 討論
第二部分 PEAK1在NSCLC增殖、遷移及侵襲中的作用
    1 材料
        1.1 主要儀器
        1.2 實驗材料
        1.3 實驗試劑
    2. 方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞凍存和復(fù)蘇
        2.3 慢病毒感染細(xì)胞
        2.4 qRT-PCR步驟
        2.5 Western blot檢測
        2.6 CCK-8 實驗
        2.7 劃痕實驗
        2.8 Transwell侵襲實驗
        2.9 裸鼠腹腔轉(zhuǎn)移實驗
        2.10 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 PEAK1在肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)水平
        3.2 過表達(dá)PEAK1后，NSCLC細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的變化
        3.3 敲除PEAK1后，NSCLC細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的變化
        3.4 PEAK1在NSCLC細(xì)胞體內(nèi)腹腔轉(zhuǎn)移中的作用
    4 討論
第三部分 PEAK1調(diào)控NSCLC細(xì)胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移的初步機(jī)制研究
    1 材料
        1.1 主要儀器
        1.2 細(xì)胞株
        1.3 實驗試劑
    2 實驗方法
        2.1 光鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化
        2.2 qRT-PCR檢測方法
        2.3 Western blot實驗
        2.4 細(xì)胞免疫熒光實驗
        2.5 HE染色
        2.6 免疫組化染色
        2.7 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 過表達(dá)PEAK1誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞獲得EMT特性
        3.2 敲除PEAK1基因誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞發(fā)生MET
        3.3 體內(nèi)實驗也發(fā)現(xiàn)PEAK1誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞獲得EMT特性
        3.4 PEAK1通過JAK2和ERK1/2 信號通路調(diào)節(jié)NSCLC遷移及侵襲
    4 討論
References
全文總結(jié)
綜述
    References
致謝
作者簡介



本文編號：3788003