目的轉(zhuǎn)錄組分析抑制絲氨酸-蘇氨酸-酪氨酸激酶1(STYK1/NOK)后倉(cāng)鼠腎正常細(xì)胞BHK21的基因表達(dá),并分析其可能作用的信號(hào)通路。方法 BHK21細(xì)胞分為空載體組(轉(zhuǎn)染6μg空載體pBs/U6)、低轉(zhuǎn)染濃度組(2μg si-STYK1/NOK質(zhì)粒+4μg空載體p Bs/U6)和高轉(zhuǎn)染濃度組(6μg si-STYK1/NOK質(zhì)粒)。轉(zhuǎn)染48 h后,Western blot檢測(cè)STYK1/NOK蛋白表達(dá),基于檢測(cè)結(jié)果,選取空載體組和高轉(zhuǎn)染濃度組提取總RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。將測(cè)序所得的序列進(jìn)行過(guò)濾比對(duì),獲得差異表達(dá)基因后,應(yīng)用R軟件進(jìn)行生物功能(GO)分析和KEGG信號(hào)通路分析。應(yīng)用STRING蛋白質(zhì)互作數(shù)據(jù)庫(kù)中的互作關(guān)系進(jìn)行差異基因蛋白互作網(wǎng)絡(luò)的分析。采用qRT-PCR驗(yàn)證關(guān)鍵差異表達(dá)基因亞甲基四氫葉酸脫氫酶2(Mthfd2)、轉(zhuǎn)錄激活因子5(Atf5),ⅡA分泌型磷脂酶A2(Pla2g2a)、6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-雙磷酸酶3(Pfkfb3)的表達(dá)。CCK-8法檢測(cè)空載體組和高轉(zhuǎn)染濃度組細(xì)胞增殖情況。結(jié)果 Western blot結(jié)果表明高轉(zhuǎn)染濃度組明顯抑制STYK1/...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1細(xì)胞及試劑
    1.2方法
        1.2.1細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及鑒定
        1.2.2轉(zhuǎn)錄組測(cè)序
        1.2.3測(cè)序結(jié)果分析
        1.2.4實(shí)時(shí)定量基因擴(kuò)增熒光（q RT-PCR）驗(yàn)證差異表達(dá)基因
        1.2.5CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖
        1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 si-RNA可抑制BHK21細(xì)胞STYK1/NOK蛋白表達(dá)
    2.2 差異表達(dá)基因分析
    2.3 差異表達(dá)基因GO功能和KEGG通路分析
    2.4 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析
    2.5 q RT-PCR驗(yàn)證差異表達(dá)基因
    2.6 2組細(xì)胞增殖情況分析
3 討論



本文編號(hào)：3779023