目的轉(zhuǎn)錄組分析抑制絲氨酸-蘇氨酸-酪氨酸激酶1(STYK1/NOK)后倉鼠腎正常細胞BHK21的基因表達,并分析其可能作用的信號通路。方法 BHK21細胞分為空載體組(轉(zhuǎn)染6μg空載體pBs/U6)、低轉(zhuǎn)染濃度組(2μg si-STYK1/NOK質(zhì)粒+4μg空載體p Bs/U6)和高轉(zhuǎn)染濃度組(6μg si-STYK1/NOK質(zhì)粒)。轉(zhuǎn)染48 h后,Western blot檢測STYK1/NOK蛋白表達,基于檢測結(jié)果,選取空載體組和高轉(zhuǎn)染濃度組提取總RNA進行轉(zhuǎn)錄組測序。將測序所得的序列進行過濾比對,獲得差異表達基因后,應(yīng)用R軟件進行生物功能(GO)分析和KEGG信號通路分析。應(yīng)用STRING蛋白質(zhì)互作數(shù)據(jù)庫中的互作關(guān)系進行差異基因蛋白互作網(wǎng)絡(luò)的分析。采用qRT-PCR驗證關(guān)鍵差異表達基因亞甲基四氫葉酸脫氫酶2(Mthfd2)、轉(zhuǎn)錄激活因子5(Atf5),ⅡA分泌型磷脂酶A2(Pla2g2a)、6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-雙磷酸酶3(Pfkfb3)的表達。CCK-8法檢測空載體組和高轉(zhuǎn)染濃度組細胞增殖情況。結(jié)果 Western blot結(jié)果表明高轉(zhuǎn)染濃度組明顯抑制STYK1/...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1細胞及試劑
    1.2方法
        1.2.1細胞瞬時轉(zhuǎn)染及鑒定
        1.2.2轉(zhuǎn)錄組測序
        1.2.3測序結(jié)果分析
        1.2.4實時定量基因擴增熒光（q RT-PCR）驗證差異表達基因
        1.2.5CCK-8法檢測細胞增殖
        1.3統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 si-RNA可抑制BHK21細胞STYK1/NOK蛋白表達
    2.2 差異表達基因分析
    2.3 差異表達基因GO功能和KEGG通路分析
    2.4 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析
    2.5 q RT-PCR驗證差異表達基因
    2.6 2組細胞增殖情況分析
3 討論



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