研究背景:人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)持續(xù)感染可以引起皮膚粘膜疣樣病變,宮頸癌、外陰癌、肛門癌和頭頸部腫瘤等多種良性或惡性疾病。宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一,發(fā)病率占女性腫瘤第二位,約70%宮頸癌患者與HPV 16/18型有關(guān)。預(yù)防HPV感染的疫苗已于2006年開始應(yīng)用,但此類疫苗僅適用于從未感染的健康個體,對現(xiàn)癥HPV感染及其所致疾病無效。尖銳濕疣(Genital Warts)是由HPV感染引起的以疣狀病變?yōu)橹鞯某Ｒ娦詡鞑ゼ膊?是我國第二大性傳播疾病,約占所有性傳播疾病的16%,大約有40種亞型的HPV可導(dǎo)致尖銳濕疣,90%以上的尖銳濕疣有HPV6/11亞型引起,至今沒有一種治療方法或藥物能根除尖銳濕疣。病毒或腫瘤治療性疫苗通過誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte,CTLs)特異性殺死腫瘤或病毒感染細(xì)胞。HPV16 E7長肽免疫時阻斷白介素10(IL-10)能夠比不阻斷白介素10誘導(dǎo)產(chǎn)生更多的特異性CTLs,并浸潤到腫瘤組織,但對腫瘤生長抑制作用甚微,提示腫瘤微環(huán)境抑制HPV治療性疫苗的療效。從兩棲動物皮膚分泌物分離...

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
第二章 CAERIN多肽抗腫瘤活性研究
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 合成多肽
        2.2.2 實驗動物
        2.2.3 動物實驗器械
        2.2.4 細(xì)胞來源
        2.2.5 實驗試劑
        2.2.6 儀器與設(shè)備
    2.3 實驗溶液的配制
        2.3.1 遺傳霉素溶液
        2.3.2 MTT溶液
        2.3.3 CAERIN多肽溶液
        2.3.4 TC-1細(xì)胞完全培養(yǎng)基
        2.3.5 HUVEC細(xì)胞完全培養(yǎng)基
        2.3.6 細(xì)胞凍存液
    2.4 實驗方法
        2.4.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.4.2 細(xì)胞換液
        2.4.3 細(xì)胞傳代
        2.4.4 細(xì)胞凍存
        2.4.5 MTT法檢測CAERIN多肽對TC-1和HUVEC增殖的影響
        2.4.6 流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測TC-1細(xì)胞凋亡
        2.4.7 建立TC-1荷瘤小鼠模型
        2.4.8 TC-1腫瘤挑戰(zhàn)實驗
        2.4.9 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.5 實驗結(jié)果
        2.5.1 CAERIN多肽對TC-1 細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞增殖的影響
        2.5.2 CAERIN多肽對TC-1 細(xì)胞凋亡的作用
        2.5.3 CAERIN1.1 和1.9 在體內(nèi)抑制TC-1 的生長
    2.6 討論
    2.7 小結(jié)
第三章 CAERIN多肽溫敏性凝膠的制備與研究
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 空白凝膠基質(zhì)成分
        3.2.2 合成多肽
        3.2.3 實驗動物
        3.2.4 細(xì)胞來源
        3.2.5 實驗試劑
        3.2.6 儀器與設(shè)備
    3.3 實驗溶液的配制
        3.3.1 戊巴比妥鈉溶液
        3.3.2 TC-1腫瘤組織消化液
    3.4 實驗方法
        3.4.1 制備CAERIN多肽溫敏凝膠
            3.4.1.1 空白凝膠基質(zhì)制備
            3.4.1.2 CAERIN多肽溫敏凝膠制備
        3.4.2 MTT實驗檢測溫敏性凝膠的抑癌作用
        3.4.3 溫敏性凝膠的特性
        3.4.4 腫瘤挑戰(zhàn)實驗
        3.4.5 局部應(yīng)用 F1/F3 凝膠治療 TC-1 腫瘤
        3.4.6 使用流式細(xì)胞儀分析腫瘤組織內(nèi)浸潤的免疫細(xì)胞
        3.4.7 統(tǒng)計分析
    3.5 實驗結(jié)果
        3.5.1 溫敏性原位凝膠的制備及其物理性質(zhì)
        3.5.2 F1/F3凝膠在體外能夠抑制TC-1增殖且性質(zhì)穩(wěn)定
        3.5.3 瘤內(nèi)注射F1/F3凝膠在體內(nèi)能夠抑制TC-1細(xì)胞的生長
        3.5.4 局部應(yīng)用F1/F3凝膠在體內(nèi)可抑制TC-1腫瘤的生長
        3.5.5 局部應(yīng)用F1/F3 凝膠招募更多T細(xì)胞和NK細(xì)胞至TC-1 腫瘤組織
    3.6 討論
    3.7 小結(jié)
第四章 CAERIN多肽提高治療性疫苗EX/MPLA/ΑNTI-IL10R抗腫瘤研究
    4.1 前言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 治療性疫苗成分
        4.2.2 合成多肽
        4.2.3 實驗動物
        4.2.4 細(xì)胞來源
        4.2.5 實驗試劑
        4.2.6 儀器與設(shè)備
    4.3 實驗溶液的配制
        4.3.1 HPV治療性疫苗
        4.3.2 CAERIN多肽溶液
    4.4 實驗方法
        4.4.1 CAERIN多肽聯(lián)合治療性疫苗免疫對TC-1 荷瘤小鼠生存周期的影響
        4.4.2 統(tǒng)計分析
    4.5 實驗結(jié)果
    4.6 討論
    4.7 小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄1 CAERIN多肽質(zhì)量分析報告
附錄2 動物實驗倫理審查表
附錄3 中英文縮略詞表
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3778314