我們先前發(fā)現(xiàn)CXCL16/CXCR6趨化因子軸激活A(yù)KT/mTOR信號(hào)可促進(jìn)前列腺癌發(fā)展。多項(xiàng)研究表明CXCL16/CXCR6趨化因子軸也參與其他腫瘤進(jìn)展,如肝癌,卵巢癌,膀胱癌等。然而,其在乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中作用有待進(jìn)一步研究。在本研究中,通過(guò)組織芯片免疫組化染色分析CXCR6在乳腺癌和正常乳腺組織芯片中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)CXCR6在乳腺癌組織中的表達(dá)高于正常乳腺組織,且在轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)中的表達(dá)也明顯高于正常淋巴結(jié),提示CXCR6可能參與了乳腺癌的轉(zhuǎn)移。流式細(xì)胞術(shù)分析CXCR6在多種乳腺癌細(xì)胞系和正常乳腺上皮細(xì)胞系HBL100中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)CXCR6在乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)陽(yáng)性率高于正常乳腺上皮細(xì)胞系HBL100,且在高轉(zhuǎn)移性的MDA-231細(xì)胞中的陽(yáng)性率最高。為了揭示CXCR6在乳腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用,我們利用慢病毒系統(tǒng)構(gòu)建CXCR6穩(wěn)定過(guò)表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞系;劃痕愈合和Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)表明CXCR6能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲;在機(jī)制研究上,我們發(fā)現(xiàn)CXCL16/CXR6趨化因子軸并不影響乳腺癌細(xì)胞的EMT進(jìn)程,但能夠顯著激活ERK1/2信號(hào)通路;敲低CXCR6的表達(dá)或...

【文章頁(yè)數(shù)】：103 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
一、緒論
二、材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器與設(shè)備
        2.1.2 主要試劑、耗材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)室自配試劑
    2.2 方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.2.3 質(zhì)粒DNA小量提取
        2.2.4 質(zhì)粒DNA大量抽提
        2.2.5 瓊脂糖凝膠DNA片段回收
        2.2.6 細(xì)胞復(fù)蘇、傳代、凍存
        2.2.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.8 過(guò)表達(dá)細(xì)胞系構(gòu)建
        2.2.9 外源細(xì)胞因子刺激實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 Transwell chamber小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)-Invasion
        2.2.12 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期
        2.2.13 CXCR6基因的穩(wěn)定敲除-shRNA
        2.2.14 蛋白免疫印跡
        2.2.15 基因表達(dá)譜芯片
        2.2.16 Trizol法提取細(xì)胞總RNA
        2.2.17 逆轉(zhuǎn)錄及Real-time PCR
        2.2.18 免疫熒光染色、鬼筆環(huán)肽染色
        2.2.19 GST-pull down實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RhoA活性
        2.2.20 點(diǎn)突變?cè)噭┖袠?gòu)建RhoA^N19和RhoA^V14質(zhì)粒
        2.2.21 小鼠尾靜脈注射-活體成像
        2.2.22 蘇木素-伊紅染色
        2.2.23 免疫組化染色
        2.2.24 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
三、結(jié)果
    3.1 CXCR6在乳腺癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá)
    3.2 CXCR6過(guò)表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建
    3.3 CXCR6促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移
    3.4 CXCL16/CXCR6趨化因子軸不影響乳腺癌細(xì)胞的EMT進(jìn)程
    3.5 CXCL16/CXCR6趨化因子軸促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞ERK1/2 通路的活化
    3.6 CXCL16/CXCR6趨化因子軸促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷移依賴于ERK1/2 通路的活化
    3.7 基因芯片分析CXCR6過(guò)表達(dá)對(duì)乳腺癌細(xì)胞全基因轉(zhuǎn)錄組的調(diào)控
    3.8 CXCR6過(guò)表達(dá)細(xì)胞系F-actin聚合增多
    3.9 CXCL16/CXCR6趨化因子軸調(diào)控F-actin的聚合依賴于ERK1/2 通路的激活
    3.10 CXCL16/CXCR6趨化因子促進(jìn)Cofilin，F(xiàn)AK的磷酸化
    3.11 CXCL16/CXCR6趨化因子軸通過(guò)激活ERK1/2 促進(jìn)RhoA/Cofilin通路的活化
    3.12 RhoA的活性狀態(tài)影響F-actin的形成
    3.13 RhoA的活性狀態(tài)影響乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲
    3.14 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明敲低CXCR6的表達(dá)能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移
四、討論
五、總結(jié)
六、參考文獻(xiàn)
七、全文縮略詞中英文對(duì)照表
八、致謝
九、攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的文章



本文編號(hào)：3774773