通過RNA干擾(RNAi)技術(shù)靶向耐藥性人肺腺癌細胞內(nèi)的MDR1基因?qū)崿F(xiàn)多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用。構(gòu)建聚乙二醇-聚谷氨酸-聚乙烯亞胺(PEG-b-PLG-g-PEIs,GGI)陽離子聚合物載體,通過¹H NMR表征確認結(jié)構(gòu),動態(tài)光散射法測定GGI/si RNA的粒徑及電位,并以A549敏感株和A549/DDP耐藥株細胞系為模型,采用MTT法考察GGI的細胞毒性,以流式細胞術(shù)評價新型聚合物載體GGI遞送si RNA的效率和強度,RT-PCR法考察GGI轉(zhuǎn)染A549和A549/DDP(cisplatin)后MDR1 m RNA水平的表達;Western blot法測定A549/DDP細胞中P-gp的表達。同時,以MTT法和Annexin V-FITC/PI雙染法考察si RNA干擾后抗腫瘤藥物對藥物敏感性的變化。結(jié)果顯示,GGI/si RNA復(fù)合物粒徑為150²00 nm,電位穩(wěn)定在16²8 m V。GGI細胞毒性遠低于PEI 25K,且具有更高運載si RNA至細胞內(nèi)的效率,并能極大降低A549/DDP細胞內(nèi)MDR1 m RN...

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【文章目錄】：
材料與方法
    材料
    聚合物GGI的合成
        聚乙二醇-b-谷氨酸芐酯(PEG-b-PBLG)的合成
        聚合物PEG-b-PLG-PEIs(GGI)的合成
    聚合物GGI的1H NMR表征
    GGI/si RNA復(fù)合物的制備與粒徑電位的測定
    細胞毒性實驗
    GGI/FAM-si RNA納米粒的細胞攝取
    GGI/MDR1 si RNA復(fù)合物的細胞轉(zhuǎn)染
    實時定量PCR(RT-PCR)
    Western blot法檢測P-gp蛋白的表達
    MDR1 si RNA干擾后對順鉑的敏感性
    Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡
    統(tǒng)計學(xué)處理
結(jié)果與討論
    1 聚合物GGI的1H NMR分析
    2 GGI/si RNA復(fù)合物的粒徑電位
    3 細胞毒性
    4 GGI/MDR1 si RNA復(fù)合物對A549和A549/DDP細胞的攝取情況
    5 MDR1 m RNA表達水平
    6 MDR基因干擾后P-gp的表達水平
    7 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測載體對細胞凋亡的影響
    8 MDR1 si RNA干擾后對順鉑的敏感性
        8.1 MTT法考察
        8.2 流式細胞術(shù)考察細胞凋亡
            8.2.1 敏感株A549細胞系的凋亡檢測
            8.2.2 耐藥株A549/DDP細胞系的凋亡檢測
結(jié)論



本文編號：3768481