目的:探討HL-60白血病細(xì)胞中核干細(xì)胞因子Nucleostemin(NS)表達(dá)下調(diào)對其非依賴P53通路的候選途徑PI3K/AKT/mTOR中相關(guān)蛋白表達(dá)是否有影響。方法:采用重組慢病毒表達(dá)載體NS-RNAi-GV248轉(zhuǎn)染至P53缺失型HL-60細(xì)胞中干擾NS的表達(dá)。用Western blot技術(shù)評價轉(zhuǎn)染后HL-60細(xì)胞NS蛋白的表達(dá)水平并檢測干擾前后PI3K/AKT/mTOR信號通路中相關(guān)蛋白水平的表達(dá)變化。結(jié)果:重組慢病毒載體NS-RNAi-GV248成功感染了HL-60細(xì)胞,在熒光顯微鏡下可見到GFP熒光表達(dá)較強(qiáng)(<80%)。Western blot結(jié)果顯示,NS蛋白表達(dá)明顯下調(diào),干擾表達(dá)有效;干擾HL-60細(xì)胞中NS的表達(dá)后AKT、p-AKT、p70s6k、p-p70s6k蛋白變化不明顯(t₁=2.31,P=0.074;t₂=3.62,P=0.069;t₃=1.60,P=0.251;t₄=2.72,P=0.113),而mTOR復(fù)合物中的GβL蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(t=15.01,P=0....

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    試劑與儀器
    細(xì)胞培養(yǎng)及計數(shù)
    重組慢病毒NS-RNAi-GV248感染目的細(xì)胞HL-60
    蛋白質(zhì)印跡 (Western blot) 檢測
    統(tǒng)計學(xué)分析
結(jié)果
    重組慢病毒載體NS-RNAi-GV248轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞
    干擾HL-60細(xì)胞中NS表達(dá)后所測相關(guān)蛋白相對表達(dá)量
討論



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