研究背景結腸癌是發(fā)生于結腸部位的消化道惡性腫瘤,是人類的一種高發(fā)性惡性腫瘤,其發(fā)病率一直呈上升趨勢,在全球惡性腫瘤發(fā)病率中已上升至第三位,嚴重危害人類健康。腫瘤轉移是晚期結腸癌患者死亡的主要原因之一,也是結腸癌臨床治療的難題。結腸癌轉移是指結腸癌腫瘤細胞從原發(fā)部位侵入淋巴管、血管或其它途經轉移到其它部位繼續(xù)生長,形成與原發(fā)部位相同類型的腫瘤。結腸癌轉移有四種途徑,包括直接浸潤、淋巴轉移、血行轉移和種植轉移,淋巴轉移是結腸癌轉移的主要途徑。結腸癌轉移的具體機制目前仍不清楚,但有報道表明腫瘤微環(huán)境(TME)中M2型巨噬細胞對腫瘤的轉移有促進作用。巨噬細胞起源于骨髓多能造血干細胞,是單核-巨噬細胞系統(tǒng)中具有吞噬功能的晚期分化細胞,也是構成機體固有免疫防線的重要部分,因其異質性、可塑性以及在維持機體穩(wěn)態(tài)中的重要性而成為醫(yī)學免疫學研究的重要內容。巨噬細胞按照其膜表面抗原和分泌的細胞因子類型可分為多種亞群,主要有經典活化的M1型巨噬細胞和替代性活化的M2型巨噬細胞。M1型巨噬細胞被認為具有促進炎癥反應和抗腫瘤免疫功能,而M2型巨噬細胞則表現(xiàn)出抗炎和促進腫瘤進展等作用。腫瘤微環(huán)境中的巨噬細胞被稱為腫...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
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第一章 引言
    1.1 結腸癌
    1.2 M2型巨噬細胞
    1.3 蛋白4.1R
    1.4 蛋白4.1R與M2型巨噬細胞
    1.5 研究目的與意義
    1.6 技術路線
第二章 骨髓來源M2型巨噬細胞的體外誘導與鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠骨髓來源M2型巨噬細胞的體外誘導培養(yǎng)
        2.2.2 流式細胞術檢測BMDM和M2型巨噬細胞的純度
        2.2.3 蛋白4.1R在M2-4.1R^+/+和M2-4.1R^-/-中的表達鑒定
    2.3 實驗結果
        2.3.1 小鼠骨髓來源巨噬細胞的純度檢測
        2.3.2 小鼠骨髓來源M2型巨噬細胞的純度檢測
        2.3.3 蛋白4.1R在M2-4.1R^+/+和M2-4.1R^-/-中的表達情況
    2.4 討論
第三章 蛋白4.1R基因敲除對M2型巨噬細胞吞噬作用和細胞因子分泌功能的影響
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要試劑配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 熒光微球法檢測蛋白4.1R對M2型巨噬細胞吞噬作用的影響
        3.2.2 qRT-PCR法檢測蛋白4.1R對 M2型巨噬細胞表達細胞因子的影響
        3.2.3 Western blot法檢測蛋白4.1R對M2型巨噬細胞中VEGFA表達的影響
        3.2.4 ELISA法檢測蛋白4.1R對 M2 型巨噬細胞分泌VEGFA的影響
        3.2.5 數據分析
    3.3 結果
        3.3.1 蛋白4.1R基因敲除對M2型巨噬細胞吞噬作用的影響
        3.3.2 qRT-PCR法檢測蛋白4.1R基因敲除對M2 型巨噬細胞表達細胞因子的影響
        3.3.3 Western blot和 ELISA法檢測蛋白4.1R基因敲除對M2 型巨噬細胞分泌VEGFA的影響
    3.4 討論
第四章 蛋白4.1R基因敲除對M2型巨噬細胞促腫瘤效應的影響
    4.1 材料
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 細胞株
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器
        4.1.5 主要試劑配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細胞培養(yǎng)
        4.2.2 共培養(yǎng)系統(tǒng)的建立
        4.2.3 劃痕實驗檢測4.1R基因敲除對M2型巨噬細胞促進MC38細胞傷口愈合能力的影響
        4.2.4 Transwell實驗檢測4.1R基因敲除對M2 型巨噬細胞促進MC38 細胞遷移能力的影響
        4.2.5 Transwell實驗檢測4.1R基因敲除對M2 型巨噬細胞促進MC38 細胞侵襲能力的影響
        4.2.6 CCK-8 法檢測4.1R基因敲除對M2 型巨噬細胞促進MC38 細胞增殖能力的影響
        4.2.7 Western blot法檢測4.1R基因敲除對M2 型巨噬細胞促進MC38 細胞EMT過程的影響
        4.2.8 裸鼠皮下移植瘤模型檢測4.1R基因敲除對M2型巨噬細胞促進MC38細胞腫瘤形成能力的影響
        4.2.9 數據分析
    4.3 實驗結果
        4.3.1 4.1R基因敲除對M2巨噬細胞促進MC38細胞傷口愈合能力的影響
        4.3.2 4.1R基因敲除對M2巨噬細胞促進MC38細胞遷移能力的影響
        4.3.3 4.1R基因敲除對M2巨噬細胞促進MC38細胞侵襲能力的影響
        4.3.4 4.1R基因敲除對M2巨噬細胞促進MC38細胞增殖能力的影響
        4.3.5 4.1R基因敲除對M2 巨噬細胞促進MC38 細胞EMT過程的影響
        4.3.6 4.1R基因敲除對M2巨噬細胞促進MC38細胞腫瘤形成能力的影響
    4.4 討論
第五章 蛋白4.1R影響結腸癌細胞的轉移和EMT過程機制探索
    5.1 材料
        5.1.1 細胞株
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
    5.2 方法
        5.2.1 Transwell檢測抑制M2-4.1R^-/-與MC38 細胞共培養(yǎng)系統(tǒng)中的VEGFA活性或PI3K/Akt通路對MC38 細胞遷移、侵襲的影響
        5.2.2 Western blot檢測4.1R基因敲除型M2 型巨噬細胞分泌VEGFA增加對MC38 細胞PI3K/Akt信號通路和EMT過程的影響
        5.2.3 數據分析
    5.3 結果
        5.3.1 4.1R基因敲除型M2 型巨噬細胞分泌VEGFA增加對MC38 細胞遷移、侵襲的影響
        5.3.2 4.1R基因敲除型M2 型巨噬細胞分泌VEGFA增加對MC38 細胞EMT過程的影響
        5.3.3 4.1R基因敲除型M2 型巨噬細胞分泌的VEGFA通過激活MC38 細胞PI3K/Akt信號通路促進其EMT過程
        5.3.4 4.1R基因敲除型M2 型巨噬細胞通過激活MC38 細胞PI3K/Akt信號通路促進其遷移和侵襲
    5.4 討論
全文總結與討論
參考文獻
個人簡歷、在學期間發(fā)表的學術論文及成果
致謝



本文編號：3747937