研究背景結(jié)腸癌是發(fā)生于結(jié)腸部位的消化道惡性腫瘤,是人類的一種高發(fā)性惡性腫瘤,其發(fā)病率一直呈上升趨勢(shì),在全球惡性腫瘤發(fā)病率中已上升至第三位,嚴(yán)重危害人類健康。腫瘤轉(zhuǎn)移是晚期結(jié)腸癌患者死亡的主要原因之一,也是結(jié)腸癌臨床治療的難題。結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移是指結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位侵入淋巴管、血管或其它途經(jīng)轉(zhuǎn)移到其它部位繼續(xù)生長(zhǎng),形成與原發(fā)部位相同類型的腫瘤。結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移有四種途徑,包括直接浸潤(rùn)、淋巴轉(zhuǎn)移、血行轉(zhuǎn)移和種植轉(zhuǎn)移,淋巴轉(zhuǎn)移是結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移的主要途徑。結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制目前仍不清楚,但有報(bào)道表明腫瘤微環(huán)境(TME)中M2型巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用。巨噬細(xì)胞起源于骨髓多能造血干細(xì)胞,是單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)中具有吞噬功能的晚期分化細(xì)胞,也是構(gòu)成機(jī)體固有免疫防線的重要部分,因其異質(zhì)性、可塑性以及在維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)中的重要性而成為醫(yī)學(xué)免疫學(xué)研究的重要內(nèi)容。巨噬細(xì)胞按照其膜表面抗原和分泌的細(xì)胞因子類型可分為多種亞群,主要有經(jīng)典活化的M1型巨噬細(xì)胞和替代性活化的M2型巨噬細(xì)胞。M1型巨噬細(xì)胞被認(rèn)為具有促進(jìn)炎癥反應(yīng)和抗腫瘤免疫功能,而M2型巨噬細(xì)胞則表現(xiàn)出抗炎和促進(jìn)腫瘤進(jìn)展等作用。腫瘤微環(huán)境中的巨噬細(xì)胞被稱為腫...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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摘要
Abstract
常見(jiàn)英文縮略一覽表
第一章 引言
    1.1 結(jié)腸癌
    1.2 M2型巨噬細(xì)胞
    1.3 蛋白4.1R
    1.4 蛋白4.1R與M2型巨噬細(xì)胞
    1.5 研究目的與意義
    1.6 技術(shù)路線
第二章 骨髓來(lái)源M2型巨噬細(xì)胞的體外誘導(dǎo)與鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠骨髓來(lái)源M2型巨噬細(xì)胞的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)
        2.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMDM和M2型巨噬細(xì)胞的純度
        2.2.3 蛋白4.1R在M2-4.1R^+/+和M2-4.1R^-/-中的表達(dá)鑒定
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 小鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞的純度檢測(cè)
        2.3.2 小鼠骨髓來(lái)源M2型巨噬細(xì)胞的純度檢測(cè)
        2.3.3 蛋白4.1R在M2-4.1R^+/+和M2-4.1R^-/-中的表達(dá)情況
    2.4 討論
第三章 蛋白4.1R基因敲除對(duì)M2型巨噬細(xì)胞吞噬作用和細(xì)胞因子分泌功能的影響
    3.1 材料
        3.1.1 主要試劑
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 熒光微球法檢測(cè)蛋白4.1R對(duì)M2型巨噬細(xì)胞吞噬作用的影響
        3.2.2 qRT-PCR法檢測(cè)蛋白4.1R對(duì) M2型巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子的影響
        3.2.3 Western blot法檢測(cè)蛋白4.1R對(duì)M2型巨噬細(xì)胞中VEGFA表達(dá)的影響
        3.2.4 ELISA法檢測(cè)蛋白4.1R對(duì) M2 型巨噬細(xì)胞分泌VEGFA的影響
        3.2.5 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 蛋白4.1R基因敲除對(duì)M2型巨噬細(xì)胞吞噬作用的影響
        3.3.2 qRT-PCR法檢測(cè)蛋白4.1R基因敲除對(duì)M2 型巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子的影響
        3.3.3 Western blot和 ELISA法檢測(cè)蛋白4.1R基因敲除對(duì)M2 型巨噬細(xì)胞分泌VEGFA的影響
    3.4 討論
第四章 蛋白4.1R基因敲除對(duì)M2型巨噬細(xì)胞促腫瘤效應(yīng)的影響
    4.1 材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 細(xì)胞株
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器
        4.1.5 主要試劑配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        4.2.2 共培養(yǎng)系統(tǒng)的建立
        4.2.3 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)4.1R基因敲除對(duì)M2型巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38細(xì)胞傷口愈合能力的影響
        4.2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)4.1R基因敲除對(duì)M2 型巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38 細(xì)胞遷移能力的影響
        4.2.5 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)4.1R基因敲除對(duì)M2 型巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38 細(xì)胞侵襲能力的影響
        4.2.6 CCK-8 法檢測(cè)4.1R基因敲除對(duì)M2 型巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38 細(xì)胞增殖能力的影響
        4.2.7 Western blot法檢測(cè)4.1R基因敲除對(duì)M2 型巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38 細(xì)胞EMT過(guò)程的影響
        4.2.8 裸鼠皮下移植瘤模型檢測(cè)4.1R基因敲除對(duì)M2型巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38細(xì)胞腫瘤形成能力的影響
        4.2.9 數(shù)據(jù)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 4.1R基因敲除對(duì)M2巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38細(xì)胞傷口愈合能力的影響
        4.3.2 4.1R基因敲除對(duì)M2巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38細(xì)胞遷移能力的影響
        4.3.3 4.1R基因敲除對(duì)M2巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38細(xì)胞侵襲能力的影響
        4.3.4 4.1R基因敲除對(duì)M2巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38細(xì)胞增殖能力的影響
        4.3.5 4.1R基因敲除對(duì)M2 巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38 細(xì)胞EMT過(guò)程的影響
        4.3.6 4.1R基因敲除對(duì)M2巨噬細(xì)胞促進(jìn)MC38細(xì)胞腫瘤形成能力的影響
    4.4 討論
第五章 蛋白4.1R影響結(jié)腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和EMT過(guò)程機(jī)制探索
    5.1 材料
        5.1.1 細(xì)胞株
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
    5.2 方法
        5.2.1 Transwell檢測(cè)抑制M2-4.1R^-/-與MC38 細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)中的VEGFA活性或PI3K/Akt通路對(duì)MC38 細(xì)胞遷移、侵襲的影響
        5.2.2 Western blot檢測(cè)4.1R基因敲除型M2 型巨噬細(xì)胞分泌VEGFA增加對(duì)MC38 細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路和EMT過(guò)程的影響
        5.2.3 數(shù)據(jù)分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 4.1R基因敲除型M2 型巨噬細(xì)胞分泌VEGFA增加對(duì)MC38 細(xì)胞遷移、侵襲的影響
        5.3.2 4.1R基因敲除型M2 型巨噬細(xì)胞分泌VEGFA增加對(duì)MC38 細(xì)胞EMT過(guò)程的影響
        5.3.3 4.1R基因敲除型M2 型巨噬細(xì)胞分泌的VEGFA通過(guò)激活MC38 細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路促進(jìn)其EMT過(guò)程
        5.3.4 4.1R基因敲除型M2 型巨噬細(xì)胞通過(guò)激活MC38 細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路促進(jìn)其遷移和侵襲
    5.4 討論
全文總結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及成果
致謝



本文編號(hào)：3747937