本文關鍵詞：血清外泌體膜蛋白GPC1在非小細胞肺癌篩查及預后評估中的應用價值，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:非小細胞肺癌是(NSCLC)全世界最常見的惡性腫瘤之一,也是癌癥相關死亡的首要原因,嚴重危害著人們的生命健康。統(tǒng)計資料顯示,NSCLC患者的五年生存率與其診斷時的分期密切相關,如果能在早期得到診斷,可明顯改善愈后。因為臨床缺乏診斷NSCLC的可靠標志物,目前大多數(shù)NSCLC患者在診斷時已出現(xiàn)遠處轉移,預后極差。所以,發(fā)現(xiàn)新的能夠早期診斷NSCLC的標志物至關重要。外泌體是由細胞分泌的小囊泡,可在血液、尿液等大多數(shù)體液中獲得。外泌體的成分包括RNA、蛋白質、脂質和代謝物,反應了來源細胞的分子指紋和細胞狀態(tài)。由于外泌體在體液中的穩(wěn)定性和可被有效分離的特性,在研究癌癥相關非侵入性早期檢測標志物方面具有巨大潛力。GPC1是肝素結合生長因子(HBGFs)的共受體,通過糖基磷脂酰肌醇(GPI)附著于細胞膜表面,在多種腫瘤組織中高表達,對腫瘤細胞的生長、轉移和血管生成都至關重要。并且腫瘤來源的外泌體比非腫瘤來源的富含GPC1。所以,外泌體膜蛋白GPC1有望成為診斷NSCLC的新標志物。目的:比較血清外泌體膜蛋白GPC1的表達水平在NSCLC患者與健康對照者之間的差異,以及手術、放化療后其表達水平的變化,探索GPC1在NSCLC篩查及預后評估中的應用價值。方法:收集18例NSCLC患者(其中9例未治療、5例手術后、4例放化療后)及9例性別年齡匹配的健康對照者的血清,用超速離心法分離血清中外泌體。經(jīng)透射電鏡鑒定外泌體的形態(tài)、Western blot鑒定外泌體的標志性蛋白CD63、CD9后,用Western blot檢測外泌體體膜蛋白GPC1的表達情況,并用蛋白顯示條帶的灰度值量化其表達水平,比較未治療組(Untreat)、手術組(Surgery)、放化療組(CHRT)和對照組(Control)各組間GPC1的表達差異。結果:1.NSCLC患者和健康對照者的血清中都檢測到直徑30-100nm的圓形或橢圓形雙層脂質膜囊泡,經(jīng)Western blot檢測顯示有CD9、CD63表達,鑒定為外泌體。2.CHRT組血清外泌體CD63的表達量明顯高于Control組、Untreat組、Surgery組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),提示放化療組外泌體釋放量與其他組相比明顯增多,可能與腫瘤對放化療的應激有關。3.Untreat組血清外泌體GPC1的表達量明顯高于Control組(P0.05),可能與NSCLC的發(fā)生有關;Surgery組和CHRT組GPC1的含量都明顯低于Untreat組(P0.05),可能與腫瘤負荷消失有關。結論:1.NSCLC患者血清外泌體膜蛋白GPC1呈高表達;2.NSCLC患者血清外泌體膜蛋白GPC1的表達水平在術后或放化療后下調;3.NSCLC患者血清外泌體在放化后釋放量增多。
【關鍵詞】：外泌體 非小細胞肺癌 GPC1
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-19
• 1.1 研究背景及意義11-12
• 1.2 綜述12-19
• 1.2.1 外泌體的形成過程13
• 1.2.2 外泌體的分離和鑒定13-14
• 1.2.3 外泌體的組成成分14-15
• 1.2.4 外泌體在腫瘤中的作用15-17
• 1.2.5 膜蛋白GPC1在腫瘤中的作用17-18
• 1.2.6 小結18-19
• 第2章 材料與方法19-25
• 2.1 實驗試劑與器材19-20
• 2.1.1 主要試劑19-20
• 2.1.2 主要實驗器材20
• 2.2 研究對象20-21
• 2.3 外泌體的分離與鑒定21-22
• 2.3.1 血清的獲得21
• 2.3.2 超速離心法分離血清外泌體21
• 2.3.3 外泌體的鑒定21-22
• 2.4 WESTERN BLOT檢測外泌體膜蛋白GPC1的表達22-24
• 2.4.1 蛋白樣品制備22
• 2.4.2 BCA法蛋白定量22-23
• 2.4.3 SDS-PAGE凝膠電泳23-24
• 2.5 統(tǒng)計分析24-25
• 第3章 結果25-32
• 3.1 基本信息25
• 3.2 血清外泌體的分離和收集25-26
• 3.3 血清外泌體的鑒定26-27
• 3.4 各組外泌體蛋白濃度無明顯差別27-28
• 3.5 放化療組釋放更多的外泌體28-29
• 3.6 GPC1的表達水平與肺癌的發(fā)生有關29-31
• 3.7 GPC1的表達水平與NSCLC分期有關31-32
• 第4章 討論32-34
• 第5章 結論34-35
• 參考文獻35-43
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果43-44
• 致謝44

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