發(fā)布時間：2017-05-17 19:19

  本文關(guān)鍵詞：血清外泌體膜蛋白GPC1在非小細(xì)胞肺癌篩查及預(yù)后評估中的應(yīng)用價值，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:非小細(xì)胞肺癌是(NSCLC)全世界最常見的惡性腫瘤之一,也是癌癥相關(guān)死亡的首要原因,嚴(yán)重危害著人們的生命健康。統(tǒng)計資料顯示,NSCLC患者的五年生存率與其診斷時的分期密切相關(guān),如果能在早期得到診斷,可明顯改善愈后。因?yàn)榕R床缺乏診斷NSCLC的可靠標(biāo)志物,目前大多數(shù)NSCLC患者在診斷時已出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,預(yù)后極差。所以,發(fā)現(xiàn)新的能夠早期診斷NSCLC的標(biāo)志物至關(guān)重要。外泌體是由細(xì)胞分泌的小囊泡,可在血液、尿液等大多數(shù)體液中獲得。外泌體的成分包括RNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和代謝物,反應(yīng)了來源細(xì)胞的分子指紋和細(xì)胞狀態(tài)。由于外泌體在體液中的穩(wěn)定性和可被有效分離的特性,在研究癌癥相關(guān)非侵入性早期檢測標(biāo)志物方面具有巨大潛力。GPC1是肝素結(jié)合生長因子(HBGFs)的共受體,通過糖基磷脂酰肌醇(GPI)附著于細(xì)胞膜表面,在多種腫瘤組織中高表達(dá),對腫瘤細(xì)胞的生長、轉(zhuǎn)移和血管生成都至關(guān)重要。并且腫瘤來源的外泌體比非腫瘤來源的富含GPC1。所以,外泌體膜蛋白GPC1有望成為診斷NSCLC的新標(biāo)志物。目的:比較血清外泌體膜蛋白GPC1的表達(dá)水平在NSCLC患者與健康對照者之間的差異,以及手術(shù)、放化療后其表達(dá)水平的變化,探索GPC1在NSCLC篩查及預(yù)后評估中的應(yīng)用價值。方法:收集18例NSCLC患者(其中9例未治療、5例手術(shù)后、4例放化療后)及9例性別年齡匹配的健康對照者的血清,用超速離心法分離血清中外泌體。經(jīng)透射電鏡鑒定外泌體的形態(tài)、Western blot鑒定外泌體的標(biāo)志性蛋白CD63、CD9后,用Western blot檢測外泌體體膜蛋白GPC1的表達(dá)情況,并用蛋白顯示條帶的灰度值量化其表達(dá)水平,比較未治療組(Untreat)、手術(shù)組(Surgery)、放化療組(CHRT)和對照組(Control)各組間GPC1的表達(dá)差異。結(jié)果:1.NSCLC患者和健康對照者的血清中都檢測到直徑30-100nm的圓形或橢圓形雙層脂質(zhì)膜囊泡,經(jīng)Western blot檢測顯示有CD9、CD63表達(dá),鑒定為外泌體。2.CHRT組血清外泌體CD63的表達(dá)量明顯高于Control組、Untreat組、Surgery組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),提示放化療組外泌體釋放量與其他組相比明顯增多,可能與腫瘤對放化療的應(yīng)激有關(guān)。3.Untreat組血清外泌體GPC1的表達(dá)量明顯高于Control組(P0.05),可能與NSCLC的發(fā)生有關(guān);Surgery組和CHRT組GPC1的含量都明顯低于Untreat組(P0.05),可能與腫瘤負(fù)荷消失有關(guān)。結(jié)論:1.NSCLC患者血清外泌體膜蛋白GPC1呈高表達(dá);2.NSCLC患者血清外泌體膜蛋白GPC1的表達(dá)水平在術(shù)后或放化療后下調(diào);3.NSCLC患者血清外泌體在放化后釋放量增多。
【關(guān)鍵詞】：外泌體 非小細(xì)胞肺癌 GPC1
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-19
• 1.1 研究背景及意義11-12
• 1.2 綜述12-19
• 1.2.1 外泌體的形成過程13
• 1.2.2 外泌體的分離和鑒定13-14
• 1.2.3 外泌體的組成成分14-15
• 1.2.4 外泌體在腫瘤中的作用15-17
• 1.2.5 膜蛋白GPC1在腫瘤中的作用17-18
• 1.2.6 小結(jié)18-19
• 第2章 材料與方法19-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與器材19-20
• 2.1.1 主要試劑19-20
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)器材20
• 2.2 研究對象20-21
• 2.3 外泌體的分離與鑒定21-22
• 2.3.1 血清的獲得21
• 2.3.2 超速離心法分離血清外泌體21
• 2.3.3 外泌體的鑒定21-22
• 2.4 WESTERN BLOT檢測外泌體膜蛋白GPC1的表達(dá)22-24
• 2.4.1 蛋白樣品制備22
• 2.4.2 BCA法蛋白定量22-23
• 2.4.3 SDS-PAGE凝膠電泳23-24
• 2.5 統(tǒng)計分析24-25
• 第3章 結(jié)果25-32
• 3.1 基本信息25
• 3.2 血清外泌體的分離和收集25-26
• 3.3 血清外泌體的鑒定26-27
• 3.4 各組外泌體蛋白濃度無明顯差別27-28
• 3.5 放化療組釋放更多的外泌體28-29
• 3.6 GPC1的表達(dá)水平與肺癌的發(fā)生有關(guān)29-31
• 3.7 GPC1的表達(dá)水平與NSCLC分期有關(guān)31-32
• 第4章 討論32-34
• 第5章 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-43
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果43-44
• 致謝44

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本文編號：374295