目的:研究鋅指蛋白ZFX在人慢性髓細(xì)胞白血�。–ML）干/祖細(xì)胞中的表達(dá)和功能。方法:（1）收集正常供體和CML患者骨髓,密度梯度離心、免疫磁珠富集及流式分選分別得到單個(gè)核細(xì)胞、CD34+細(xì)胞及CD34+靜息期細(xì)胞,qRT-PCR法檢測ZFX表達(dá)水平;（2）利用慢病毒載體沉默ZFX表達(dá),通過細(xì)胞增殖和集落生成檢測ZFX沉默對正常骨髓和CML患者CD34+細(xì)胞生長等的影響;（3）伊馬替尼（Imatinib mesylate,IM）與靶向ZFX共同處理CML患者CD34+細(xì)胞,研究靶向ZFX對藥物敏感性的影響;（4）IM處理CML患者CD34+細(xì)胞和K562細(xì)胞,檢測ZFX表達(dá)的變化,以探究BCR-ABL如何調(diào)控ZFX表達(dá);（5）CML患者CD34+細(xì)胞中沉默ZFX表達(dá),microarray分析ZFX沉默所引發(fā)的基因表達(dá)變化,探討ZFX的作用機(jī)制。結(jié)果:（1）ZFX在健康供體CD34+細(xì)胞中表達(dá)高于成熟細(xì)胞,ZFX沉默抑制正常骨髓CD34+細(xì)胞的生長;（2）CML患者中ZFX的表達(dá)顯著高于正常對照細(xì)胞;（3）ZFX沉默抑制CML患者CD34+細(xì)胞生長;（4）ZFX沉默增強(qiáng)患者CD34+細(xì)胞... 

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
材料和方法
    一、實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    二、實(shí)驗(yàn)方法
        1、細(xì)胞培養(yǎng)
        2、正常骨髓及慢性髓系白血病患者骨髓造血干/祖細(xì)胞分離純化
        3、質(zhì)粒擴(kuò)增
        4、病毒的制備和細(xì)胞侵染
        5、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        6、集落生成試驗(yàn)（CFC）
        7、細(xì)胞凋亡檢測
        8、細(xì)胞總RNA提取
        9、熒光定量PCR
        10、蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western blot）
        11、免疫熒光染色（Immunofluorescence, IF）
        12、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1、ZFX維持正常造血CD34~+細(xì)胞的生長
    2、ZFX在CML細(xì)胞中較正常對照細(xì)胞高表達(dá)
    3、ZFX沉默抑制CML患者CD34~+細(xì)胞生長
    4、沉默ZFX增強(qiáng)CML患者CD34~+細(xì)胞的伊馬替尼敏感性
    5、IM處理激活Caspase降解ZFX蛋白
    6、基因芯片分析篩選ZFX調(diào)控基因
討論
參考文獻(xiàn)
綜述 人類慢性粒細(xì)胞白血病發(fā)病機(jī)制及治療的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文
主要試劑配制
中英文縮略詞匯表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鋅指蛋白ZFX在兒童B系急性淋巴細(xì)胞性白血病中的表達(dá)及意義[J]. 王卓,梁歡歡,李本尚,黃小航,張婧,王翔,丁麗霞,江華.  中國當(dāng)代兒科雜志. 2013(07)



本文編號(hào)：3733900