目的:探討缺氧狀態(tài)下胰腺星狀細(xì)胞的單核細(xì)胞趨化因子7（C-C motif chemokine ligand 7,CCL7）表達(dá)情況及其對胰腺癌侵襲的影響。方法:通過組織塊外植法獲得人腫瘤相關(guān)胰腺星狀細(xì)胞（pancreatic stellate cells,PSCs）,于常氧（20%O₂）、缺氧（1%O₂）下培養(yǎng),并通過人趨化因子抗體芯片技術(shù)分析其上清液中多種趨化因子的表達(dá)差異;通過加入不同濃度外源性人重組蛋白CCL7（0、1、10、100 ng/mL）研究趨化因子CCL7與胰腺癌細(xì)胞侵襲之間的濃度依賴關(guān)系;使用慢病毒轉(zhuǎn)染、Transwell等技術(shù)著重分析缺氧PSCs過表達(dá)的CCL7促胰腺癌侵襲的作用。結(jié)果:相較于常氧培養(yǎng)PSCs,缺氧培養(yǎng)PSCs的條件培養(yǎng)基可顯著增強(qiáng)胰腺癌侵襲能力（P＜0.05）;缺氧培養(yǎng)下PSCs上清液中CCL7相較于常氧培養(yǎng)顯著高表達(dá)（fold change=2.38）;外源性重組CCL7蛋白（0、1、10、100 ng/mL）可顯著增加胰腺癌細(xì)胞（Miapaca-2、Colo357）侵襲能力,且呈濃度依賴關(guān)系。流式細(xì)胞... 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 激活態(tài)的人PSCs提取
        1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.3 CCL7沉默慢病毒轉(zhuǎn)染PSCs(sh-CCL7 PSCs)
        1.2.4 Western blot印跡
        1.2.5 細(xì)胞侵襲能力檢測
        1.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞膜蛋白
        1.2.7 RNA提取及實(shí)時定量PCR
        1.2.8 外源性人重組蛋白CCL7的復(fù)原、存放及使用
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 缺氧培養(yǎng)PSCs的CCL7表達(dá)較常氧培養(yǎng)顯著增加
    2.2 CCL7受體(CCR1、CCR2、CCR3、CCR5)在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況
    2.3 PSCs的CCL7表達(dá)對胰腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響
    2.4 缺氧微環(huán)境中PSCs通過CCL7/CCR5軸誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞EMT并促進(jìn)侵襲
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]CCL7 and CCL21 overexpression in gastric cancer is associated with lymph node metastasis and poor prognosis[J]. Tsann-Long Hwang,Li-Yu Lee,Chee-Chan Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2012(11)



本文編號：3727935