目的:探討缺氧狀態(tài)下胰腺星狀細胞的單核細胞趨化因子7（C-C motif chemokine ligand 7,CCL7）表達情況及其對胰腺癌侵襲的影響。方法:通過組織塊外植法獲得人腫瘤相關胰腺星狀細胞（pancreatic stellate cells,PSCs）,于常氧（20%O₂）、缺氧（1%O₂）下培養(yǎng),并通過人趨化因子抗體芯片技術分析其上清液中多種趨化因子的表達差異;通過加入不同濃度外源性人重組蛋白CCL7（0、1、10、100 ng/mL）研究趨化因子CCL7與胰腺癌細胞侵襲之間的濃度依賴關系;使用慢病毒轉染、Transwell等技術著重分析缺氧PSCs過表達的CCL7促胰腺癌侵襲的作用。結果:相較于常氧培養(yǎng)PSCs,缺氧培養(yǎng)PSCs的條件培養(yǎng)基可顯著增強胰腺癌侵襲能力（P＜0.05）;缺氧培養(yǎng)下PSCs上清液中CCL7相較于常氧培養(yǎng)顯著高表達（fold change=2.38）;外源性重組CCL7蛋白（0、1、10、100 ng/mL）可顯著增加胰腺癌細胞（Miapaca-2、Colo357）侵襲能力,且呈濃度依賴關系。流式細胞... 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 激活態(tài)的人PSCs提取
        1.2.2 細胞培養(yǎng)
        1.2.3 CCL7沉默慢病毒轉染PSCs(sh-CCL7 PSCs)
        1.2.4 Western blot印跡
        1.2.5 細胞侵襲能力檢測
        1.2.6 流式細胞術檢測細胞膜蛋白
        1.2.7 RNA提取及實時定量PCR
        1.2.8 外源性人重組蛋白CCL7的復原、存放及使用
    1.3 統(tǒng)計學方法
2 結果
    2.1 缺氧培養(yǎng)PSCs的CCL7表達較常氧培養(yǎng)顯著增加
    2.2 CCL7受體(CCR1、CCR2、CCR3、CCR5)在胰腺癌細胞中的表達情況
    2.3 PSCs的CCL7表達對胰腺癌細胞侵襲能力的影響
    2.4 缺氧微環(huán)境中PSCs通過CCL7/CCR5軸誘導胰腺癌細胞EMT并促進侵襲
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]CCL7 and CCL21 overexpression in gastric cancer is associated with lymph node metastasis and poor prognosis[J]. Tsann-Long Hwang,Li-Yu Lee,Chee-Chan Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2012(11)



本文編號：3727935