腫瘤是臨床常見的疾病,可分為良性腫瘤和惡性腫瘤。惡性腫瘤已經(jīng)成為全球造成人類死亡的主要疾病之一。目前針對惡性腫瘤的治療方法包括手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療、中醫(yī)中藥治療和生物治療。BCG在臨床膀胱癌和黑色素瘤的治療中具有明顯的效果,但是其作用機(jī)理尚未明確。研究結(jié)果顯示膀胱癌患者在BCG灌注48小時后,尿液中的白細(xì)胞明顯增多,其中巨噬細(xì)胞雖然占的比例不多,但是其增加趨勢最為明顯。這表明巨噬細(xì)胞在BCG抗腫瘤效應(yīng)中發(fā)揮重要作用。巨噬細(xì)胞極化及功能與其代謝密切相關(guān),M1型巨噬細(xì)胞呈現(xiàn)出比較高的有氧糖酵解水平,而缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α是調(diào)控糖酵解的上游轉(zhuǎn)錄因子,但是HIF-1α介導(dǎo)的糖酵解是否與BCG刺激巨噬細(xì)胞極化及發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)有關(guān)還不清楚。為了研究BCG誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的抗腫瘤作用及相關(guān)機(jī)制,本課題通過在體外用BCG刺激小鼠原代骨髓來源的巨噬細(xì)胞（BMDM）,檢測其極化表型和抗腫瘤功能,并用LysMCre^-/+HIF-1α^Flox/Flox條件性敲除小鼠的BMDM探究HIF-1α在BCG刺激的巨噬細(xì)胞向M1型極化并發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)中的作用及機(jī)制�；�... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 BCG的作用及相關(guān)研究進(jìn)展
        1.1.1 BCG在疾病治療中的作用
        1.1.2 BCG對免疫細(xì)胞的影響
    1.2 巨噬細(xì)胞的極化與功能
        1.2.1 巨噬細(xì)胞的極化
        1.2.2 巨噬細(xì)胞的功能
        1.2.3 巨噬細(xì)胞的糖代謝
    1.3 糖酵解抑制劑2-DG的作用及相關(guān)研究進(jìn)展
        1.3.1 2-DG在疾病治療中的作用
        1.3.2 2-DG對免疫細(xì)胞的影響
    1.4 HIF-1α與糖酵解
        1.4.1 HIF-1α的結(jié)構(gòu)
        1.4.2 HIF-1α與糖酵解
課題設(shè)計思路
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)對象
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 其他主要試劑的制備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 BMDM誘導(dǎo)方法
        2.2.2 流式檢測
        2.2.3 BMDM細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 總RNA提取及濃度檢測
        2.2.5 逆轉(zhuǎn)錄
        2.2.6 RT-qPCR反應(yīng)
        2.2.7 CCK-8 檢測
        2.2.8 小鼠基因型鑒定
        2.2.9 蛋白提取
        2.2.10 蛋白濃度測定及樣本制備
        2.2.11 免疫蛋白印跡
        2.2.12 乳酸含量檢測
        2.2.13 移植瘤接種實(shí)驗(yàn)
        2.2.14 ELISA檢測
        2.2.15 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 BCG刺激BMDM向 M1 型極化并發(fā)揮抗腫瘤作用
        3.1.1 C57BL/6鼠BMDM的鑒定
        3.1.2 BCG刺激的BMDM向 M1 型極化
        3.1.3 BCG刺激的BMDM對 B16-F10及MCA207 具有殺傷作用
    3.2 糖酵解抑制劑2-DG抑制BCG刺激的BMDM向 M1 型極化及其抗腫瘤作用
        3.2.1 2-DG抑制BMDM分泌乳酸
        3.2.2 2-DG抑制BCG刺激BMDM向 M1 型極化
        3.2.3 2-DG抑制BCG刺激的BMDM的抗腫瘤作用
    3.3 HIF-1α在 BCG刺激的BMDM向 M1 型極化并發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)中的作用
        3.3.1 HIF-1α條件性敲除小鼠的鑒定
        3.3.2 巨噬細(xì)胞中的HIF-1α對其抗腫瘤作用的影響
        3.3.3 BCG刺激HIF-1α缺失的BMDM表型鑒定
        3.3.4 BCG刺激HIF-1α缺失的BMDM對腫瘤細(xì)胞殺傷作用的檢測
    3.4 HIF-1α調(diào)控BCG刺激BMDM向 M1 型極化并發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)的相關(guān)機(jī)制
        3.4.1 2-DG抑制BMDM釋放乳酸
        3.4.2 2-DG抑制BCG刺激BMDM向 M1 型極化及其抗腫瘤作用
第4章 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在校期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中藥提取物調(diào)控巨噬細(xì)胞極化研究進(jìn)展[J]. 張滿,胡旭東,陶艷艷,劉洪亮,劉成海.  中國中醫(yī)藥信息雜志. 2019(11)
[2]法舒地爾調(diào)控巨噬細(xì)胞極化改善糖尿病小鼠心肌纖維化[J]. 謝發(fā)江,蔣松辰,高尚遠(yuǎn),李燕,冉茂霞,李家富,馮健.  中國病理生理雜志. 2019(05)
[3]卡介苗（BCG）通過誘導(dǎo)IL-12產(chǎn)生和受體表達(dá)促進(jìn)人NK細(xì)胞功能[J]. 周暉,范艷瑩,吳長有.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2009(11)
[4]活化巨噬細(xì)胞通過接觸導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡[J]. 張領(lǐng)兵,于樂洋,閆東梅,馬威,杜柏榕,朱迅.  中國免疫學(xué)雜志. 2007(03)



本文編號：3722304